[发明专利]一种金枪鱼鱼卵二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽

说明书

本发明公开了一种金枪鱼鱼卵二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽及其用途，该二肽基肽酶Ⅳ(DPP‑Ⅳ)抑制寡肽的氨基酸序列为Glu‑Ile‑Pro‑Gly‑Thr‑Arg‑Gly‑Pro‑Leu，分子量为939.07Da。本发明制备的金枪鱼鱼卵的二肽基肽酶Ⅳ(DPP‑Ⅳ)抑制寡肽可显著抑制DPP‑Ⅳ活力，降低模型小鼠餐后血糖水平，改善小鼠口服葡萄糖糖耐量和麦芽糖糖耐量，降低模型小鼠的甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)的含量，且安全无毒副作用；可应用于制备治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特殊医学用途食品、保健产品和药物。

技术领域

本发明涉及多肽技术领域，具体涉及一种源于金枪鱼鱼卵具有治疗II型糖尿病用途的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)的抑制寡肽。

背景技术

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。II型糖尿病(diabetes mellitus type 2，T2DM)，旧称非胰岛素依赖型糖尿病或成人发病型糖尿病，是一种多在35～40岁之后发病的慢性代谢疾病。国家卫计委最新公布数据表明，我国糖尿病人群已达1.14亿人，超过90％是II型糖尿病占患者。

胰高血糖素样肽1(GLP-1)是肠道L细胞分泌的一种由30个氨基酸组成的脑肠肽，具有促进胰岛素分泌、抑制胰高血糖素分泌和刺激胰岛β细胞增殖等生物学作用。GLP-1不仅具有调控血糖和能量代谢的作用，还有保护心肌细胞、改善心脏功能和舒张血管等作用，直接或间接发挥心血管保护效应。但是，GLP-1在体内极易被二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)降解，其血浆半衰期很短(1～2min)。因此，基于GLP-1的II型糖尿病药物研发主要有两个方向：可以抵抗DPP-Ⅳ降解的GLP-1受体激动剂和二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制剂。

金枪鱼是世界远洋渔业的重要作业鱼种，占公海渔业总产量70％以上。在金枪鱼加工过程中产生约占总重量50％～70％的副产物，这些副产物主要是金枪鱼内脏，碎肉，鱼头、鱼皮和鱼骨等，大量作为饲料原料或初级饲料利用，造成了金枪鱼资源的极大浪费，也给生态环境带来了较大压力。

基于此，申请人选用金枪鱼加工副产物-鱼卵为原料，设计酶解和色谱制备工艺制备二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制寡肽，该寡肽活性显著且安全无毒性，可应用于治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特殊医学用途食品、保健产品和药物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供了一种金枪鱼鱼卵二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)抑制寡肽，其可应用于制备治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特殊医学用途食品、保健产品和药物。

一种金枪鱼鱼卵的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)抑制寡肽，该寡肽为九肽化合物，氨基酸序列为Glu-Ile-Pro-Gly-Thr-Arg-Gly-Pro-Leu(EIPGTRGPL)，ESI-MS测定分子量为939.07Da。

一种金枪鱼鱼卵的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)抑制寡肽的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

1)鱼卵的预处理：金枪鱼鱼卵解冻，去杂，组织捣碎机捣碎，加入丙酮溶液，200W超声15-20min脱脂，重复三次，于4℃、9000rmp离心15～20min，固体沉淀干燥，得脱脂鱼卵；

2)鱼卵的酶解：将上述脱脂鱼卵加入到pH 1.5～2.5缓冲液中，搅匀，溶液调温至37℃，加入脱脂鱼卵重量2.0～2.5％蛋白酶A，酶解3～4h；然后调溶液pH至6.5～7.5，加入脱脂鱼卵重量2.0～2.5％蛋白酶B，酶解4～5h；酶解结束后，溶液冷却至室温，于12000rmp离心10～15min，收集上清液，得金枪鱼鱼卵蛋白酶解液；