[发明专利]一种生产核黄素的发酵培养基及发酵方法

权利要求书

1.一种生产核黄素的发酵方法，其特征在于，其包括以下步骤：（1）配置发酵培养基；（2）灭菌；（3）接种枯草芽孢杆菌种子液；（4）发酵培养；

（1）配置发酵培养基：葡萄糖20-30g/L、酵母粉10-20g/L、黄豆饼粉10-20g/L、玉米浆10-20g/L、柠檬酸钠2-5g/L、磷酸氢二钾3-6g/L、硫酸铵1-3g/L、硝酸钠0.5-1.5g/L和浓度为40-50g/L的谷氨酰胺母液100-200mL，其余为水，将上述组分按照用量分别称量好，接着将上述原料混合充分溶解，得到发酵培养基；

（2）灭菌：将步骤（1）中配置好的所述发酵培养基进行灭菌；

（3）接种枯草芽孢杆菌种子液：将OD值为10-12的枯草芽孢杆菌种子液接种到步骤（2）中灭菌后的所述发酵培养基中，接种的所述枯草芽孢杆菌种子液的体积占所述发酵培养基的体积的10-15％，得到发酵液；

其中枯草芽孢杆菌的保藏地为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO .21202；

（4）发酵培养：将步骤（3）中的所述发酵液于发酵罐中发酵，控制所述发酵罐内的罐压、通气量以及搅拌速度，使得所述发酵液中的溶氧量控制在25-35%，发酵周期为40h，既得核黄素，其中在发酵过程中通过添加pH调节剂调节所述发酵液的pH值，使得所述发酵液在0-20h的pH值为6.9-7.1，20-30h的pH值为6.7-6.9，30-40h的pH值为6.4-6.6。

2.根据权利要求1所述的一种生产核黄素的发酵方法，其特征在于，步骤（2）中的所述灭菌的温度为121-125℃，灭菌的时间为20-30min。

3.根据权利要求1所述的一种生产核黄素的发酵方法，其特征在于，制备步骤（3）中所述枯草芽孢杆菌种子液的方法包括以下步骤：a、选取菌种；b、斜面培养；c、一级种子培养；d、二级种子培养；

a、选取菌种：选取合格且优良的枯草芽孢杆菌；

b、斜面培养：将步骤a中的所述枯草芽孢杆菌接种至斜面培养基，接着在温度为35-37℃培养箱内培养24-30h；

c、一级种子培养：从步骤b培养完成的所述斜面培养基上刮取两环菌种接种于摇瓶内的100ml的液体培养基上，摇瓶的转速200rpm，培养的温度为36.5-38℃，培养周期为24-25h，得到OD值为8-9的一级种子；

d、二级种子培养：将步骤c中的所述一级种子接种到置于二级种子罐中的二级种子培养基上，接种的所述一级种子的体积占所述二级种子培养基的体积的12-16%，所述二级种子罐中的罐压控制在0.03-0.05Mpa，通气比控制在0.6-1.0vvm，罐温控制在36-36.5℃，所述二级种子罐内的搅拌速度控制在160-200rpm，培养周期为18-20h，得到OD值为10-12的所述枯草芽孢杆菌种子液。

4. 根据权利要求3所述的一种生产核黄素的发酵方法，其特征在于，步骤d中所述二级种子培养基的组成为：葡萄糖15g/L、酵母粉15g/L、硫酸铵6g/L、磷酸氢二钾2.5g/L、硫酸镁1.2g/L、消泡剂0.3mL/L、生物素0.2mg/L、VB1 2mg/L，其余为水。

5.根据权利要求1所述的一种生产核黄素的发酵方法，其特征在于，在步骤（4）中所述发酵罐中的所述发酵液的发酵条件为：所述发酵罐内的发酵温度控制在36-37℃，所述发酵罐内的压力控制在0.04-0.08Mpa，所述发酵罐内的通气量控制在10-35L/min，所述发酵罐内的搅拌速度控制在200-800rpm。

6.根据权利要求1所述的一种生产核黄素的发酵方法，其特征在于，步骤（4）中的所述pH调节剂选用氨水。