[发明专利]一种恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合及其应用

权利要求书

1.一种恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合，其特征在于，所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合包括特异性扩增并检测2019-nCoV的ORF1ab基因和核壳蛋白N基因的特异性引物对和探针；

所述探针的结构包括从5’端到3’端顺次连接的5’端序列、荧光发生基团、四氢呋喃、间隔序列、荧光淬灭基团、3’端序列和C3阻断基团。

2.根据权利要求1所述的恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合，其特征在于，所述5’端序列的长度为不少于30bp；

优选地，所述荧光发生基团包括FAM、ROX或CY5中的任意一种；

优选地，所述间隔序列的长度为2～5bp；

优选地，所述荧光淬灭基团包括BHQ1或BHQ2中的任意一种；

优选地，所述3’端序列的长度为不少于13bp。

3.根据权利要求1或2所述的恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合，其特征在于，检测所述ORF1ab基因的探针的荧光发生基团包括FAM，荧光淬灭基团包括BHQ1；

优选地，检测所述核壳蛋白N基因的探针的荧光发生基团包括ROX，荧光淬灭基团包括BHQ2。

4.根据权利要求1～3任一项所述的恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合，其特征在于，扩增所述ORF1ab基因的特异性引物对包括SEQ ID No.1～2所示的核苷酸序列，检测所述ORF1ab基因的探针包括SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；

优选地，扩增所述核壳蛋白N基因的特异性引物对包括SEQ ID No.4～5所示的核苷酸序列，检测所述核壳蛋白N基因的探针包括SEQ ID No.6所示的核苷酸序列。

5.根据权利要求1～4任一项所述的恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合，其特征在于，所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合还包括特异性扩增并检测内标基因GAPDH的特异性引物对和探针；

优选地，检测所述内标基因GAPDH的探针的荧光发生基团包括CY5，荧光淬灭基团包括BHQ2；

优选地，扩增所述内标基因GAPDH的特异性引物对包括SEQ ID No.7～8所示的核苷酸序列，检测所述内标基因GAPDH的探针包括SEQ ID No.9所示的核苷酸序列。

6.一种恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的试剂盒，其特征在于，所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的试剂盒包括权利要求1～5任一项所述的恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合；

优选地，所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的试剂盒还包括缓冲液、酶混合物、激活剂、阳性对照和阴性对照；

优选地，所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合制成引物探针混合液；

优选地，所述酶混合物包括结合单链核酸的重组酶、单链DNA结合蛋白、链置换DNA聚合酶和解旋酶；

优选地，所述引物探针混合液、酶混合物和缓冲液制成预混液；

优选地，所述预混液中，引物探针混合液、酶混合物和缓冲液的体积比为1:(1～2):(3～5)，优选为3:5:11。

7.权利要求6所述的恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：

提取样本的RNA，使用权利要求6所述的恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的试剂盒进行RPA恒温扩增，根据检测反应的Ct值进行判断。