[发明专利]蚕豆抗盐基因F-box及其应用

说明书

本发明提供蚕豆抗盐基因F‑box及其应用。本发明首次从蚕豆中克隆到抗盐F‑box基因Vf062764.1，该基因cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，核苷酸长度为1749bp，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，包括582个氨基酸。本发明实验发现蚕豆抗盐F‑box基因Vf062764.1能够显著提高拟南芥和烟草的抗盐性。本发明所述的抗盐基因将促进抗盐植物新品种(系)的培育进程。

技术领域

本发明涉及植物生物工程技术领域，具体涉及蚕豆抗盐基因F-box及其应用。

背景技术

近年来全球气候正在不断变化，土壤盐渍化对农业生产危害严重，盐胁迫已经成为造成作物减产的主要非生物胁迫之一，预计超过50％的耕地都将遭受盐胁迫的侵害。因此，解决植物耐盐问题是实现农业可持续发展的重要挑战。

传统作物抗盐育种周期长、投入大且受抗盐种质资源狭窄等因素的制约，导致当前抗盐育种进展缓慢。在有限的土壤资源下，改良作物的品质，提高作物耐盐能力已经成为目前亟待解决的事情。随着测序技术的不断发展，转录组测序(RNA-seq)技术是目前使用最多最广泛的测序技术，可以快速地获得某一组织或细胞在特定条件下的所有转录本信息，RNA-seq可以帮助快速筛选鉴定与盐胁迫有关的基因。通过分子生物学的手段对蚕豆耐盐的分子机制进行深入研究，并找出潜在的耐盐基因，对培育耐盐品种蚕豆具有重要的作用。我们通过鉴定蚕豆的抗盐种质资源，找到了极端耐盐的蚕豆种质后，以极端抗盐和极端敏感蚕豆种质作为材料，采用RNA-seq方法分析盐胁迫条件下抗盐种质与敏感种质的基因表达差异，从中鉴定了抗盐基因Vf062764.1，并在拟南芥中通过过表达载体超量表达，证实了Vf062764.1能够提高拟南芥耐盐性，可以作为一种抗盐基因资源用于植物的抗盐育种。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供蚕豆抗盐基因F-box及其应用。

本发明的目的之一在于提供了一种蚕豆抗盐F-box基因Vf062764.1，以解决当前抗盐基因资源匮乏的现状。

本发明的目的之二在于提供一种蚕豆抗盐F-box基因Vf062764.1制备方法，实现该基因在蚕豆中快速、准确分离。

本发明目的之三在于提供蚕豆抗盐F-box基因Vf062764.1在提高植物抗盐性中的应用。这些植物包括烟草、拟南芥。

本发明技术方案主要包括以下内容：

分析鉴定到一种蚕豆抗盐基因Vf062764.1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，长度为1749bp。

一种由基因Vf062764.1编码的蚕豆抗盐蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，由582个氨基酸组成。

蚕豆抗盐基因Vf062764.1的制备方法，包括以下步骤：

以经过质量浓度0.8％氯化钠浸泡24h后的蚕豆种子为材料，提取总RNA，反转录合成cDNA第一链，PCR扩增该基因片段，回收PCR产物。

PCR扩增所使用的全长引物为(下划线序列为构建载体的接头序列)：

上游引物Vf062764.1-F1：

5’-CGACGACAAGACCGTGATGAATACTGTTAAAAAACTCAAGAG-3’

下游引物Vf062764.1-R1：

5’-GAGGAGAAGAGCCGTCTACAAAATTATGAGCTGACAGTG-3’。

蚕豆抗盐基因Vf062764.1的拟南芥过表达载体的构建方法，包括以下步骤：