[发明专利]结直肠癌诊断标志物、PAP检测探针以及结直肠癌的检测试剂盒

说明书

本发明公开了结直肠癌诊断标志物、PAP检测探针以及结直肠癌的检测试剂盒。所述结直肠癌诊断标志物选自KRAS‑G12D、KRAS‑G12C、KRAS‑G13D、KRAS‑Q61H、NRAS‑Q61K、NRAS‑Q61R、NRAS‑G12D或BRAF‑V600E。本发明所述结直肠癌诊断标志物与结直肠癌密切相关，对于结直肠癌的表征具有较高的可靠性，采用所述结直肠癌标志物的组合，能够辅助评价结直肠癌患者的预后、对于化疗效果的预测以及选择有效靶向药物。本发明提供的检测试剂盒含有高特异性的PAP探针以及用于反应质控的阴性和阳性模板，能够高特异性地实现结直肠癌标志物的体外扩增且准确性高。

技术领域

本发明涉及肿瘤诊断标志物，尤其涉及结直肠癌诊断标志物以及检测PAP探针，本发明进一步涉及结直肠癌的检测试剂盒，属于结直肠癌诊断或检测领域。

背景技术

人体在各种不良因素的作用下，身体内部某个或者某些部位组织中的细胞发生异常增生而形成肿瘤，发生异常增生的细胞就是肿瘤细胞。根据肿瘤细胞的特性及其对机体的危害性程度，可将肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤两大类。在医学上，癌是指起源于上皮组织的恶性肿瘤，是恶性肿瘤中最常见的一类，一般人们所说的“癌症”习惯上泛指所有恶性肿瘤。

结直肠癌是常见的恶性肿瘤，发病率高，早期没有明显症状，传统检测方法如大便隐血存在灵敏度和特异度较低，而结肠镜检查为有创检查，患者依从性差，检查花费高。在结直肠诊治过程中，缺乏简单有效的无创手段监测患者的治疗效果和复发。因此，急需一种无创、经济和高效的检测手段对结直肠癌患者进行病程管理，从而在基因分型指导下进行个体化治疗，对于指导临床用药至关重要。有研究表明，RAS通路在结直肠癌的发生和发展过程中起着重要作用，而KRAS、BRAF突变对于化疗方案的选择和预测治疗效果有着重要意义，通过检测RAS通路中KRAS、NRAS和BRAF基因的突变来诊断结直肠癌也逐渐被国内外广泛使用。目前，常通过实时定量聚合酶链锁反应(Quantitative Realtime Polymerase ChainReaction，Q-PCR)、多重引物PCR(multiplex PCR)和诊断试剂盒等方式对患者进行相关位点的基因突变检测。

CN110894530A公开了一种结肠癌相关分子标志物基因突变的crRNA、检测试剂盒与检测方法，所述crRNA包括：KRAS-exon2突变位点的crRNA、KRAS-exon3突变位点的crRNA、NRAS-exon2基因突变位点的crRNA以及BRAF基因突变位点的crRNA，能够实现多位点同时检测，但检测方法的特异性需要进一步提高。

CN102304581A公开了一种用于检测KRAS基因第2外显子密码子12和/或密码子13突变的试剂盒，包括特异性引物对，可以检测KRAS基因外显子2密码子12和密码子13上的所有突变类型，但检测方法的准确性需要进一步提高。

因此，提供一种特异性高、准确性高、步骤简便、成本较低的结肠癌相关基因检测方法指导病程管理，在结肠癌症治疗领域具有重要意义。

发明内容

本发明的目的之一是提供结直肠癌诊断标志物；

本发明的目的之二提供检测所述结直肠癌标志物的PAP探针；

本发明的目的之三将所述的结直肠癌诊断标志物及其PAP探针应用于检测结直肠癌，进而提供诊断或检测结直肠癌的试剂盒。

为实现上述之目的，本发明一方面提供了结直肠癌诊断标志物，所述结直肠癌诊断标志物选自KRAS-G12D、KRAS-G12C、KRAS-G13D、KRAS-Q61H、NRAS-Q61K、NRAS-Q61R、NRAS-G12D或BRAF-V600E中的任意一种或一种以上的任意组合。

其中，所述“KRAS-G12D”是指KRAS的第2外显子第12位由甘氨酸(G)突变为天冬氨酸(D)，作为本发明一种优选的具体实施方案，所述KRAS-G12D是包括SEQ ID NO:1所示的核酸序列。