[发明专利]结直肠癌诊断标志物、PAP检测探针以及结直肠癌的检测试剂盒

权利要求书

1.结直肠癌诊断标志物，其特征在于，所述结直肠癌诊断标志物选自KRAS-G12D、KRAS-G12C、KRAS-G13D、KRAS-Q61H、NRAS-Q61K、NRAS-Q61R、NRAS-G12D或BRAF-V600E中的任意一种或一种以上的任意组合。

2.按照权利要求1所述的结直肠癌诊断标志物，其特征在于，所述KRAS-G12D是指KRAS的第2外显子第12位由甘氨酸突变为天冬氨酸；所述KRAS-G12C是指KRAS第2外显子第12位由甘氨酸突变为半胱氨酸；所述KRAS-G13D是指KRAS第2外显子第13位由甘氨酸突变为天冬氨酸；所述KRAS-Q61H指KRAS第3外显子第61位由谷氨酰胺突变为组氨酸；所述NRAS-Q61K是指NRAS第3外显子第61位由谷氨酰胺突变为赖氨酸；所述NRAS-Q61R指NRAS第3外显子第61位由谷氨酰胺突变为精氨酸；所述NRAS-G12D指NRAS第2外显子第12位由甘氨酸突变为天冬氨酸；所述BRAF-V600E指BRAF的外显子15第600位由缬氨酸突变为谷氨酸。

3.按照权利要求1或2所述的结直肠癌诊断标志物，其特征在于，所述KRAS-G12D是包括SEQ ID NO:1所示的核酸序列，所述KRAS-G12C是包括SEQ ID NO:2所示的核酸序列，所述KRAS-G13D是包括SEQ ID NO:3所示的核酸序列，所述KRAS-Q61H是包括SEQ ID NO:4所示的核酸序列，所述NRAS-Q61K是包括SEQ ID NO:5所示的核酸序列，所述NRAS-Q61R包括SEQ IDNO:6所示的核酸序列，所述NRAS-G12D是包括SEQ ID NO:7所示的核酸序列，所述BRAF-V600E是包括SEQ ID NO:8所示的核酸序列。

4.用于检测权利要求1或2所述结直肠癌诊断标志物的探针或引物；优选的，所述的检测探针是PAP探针；更优选的，检测结直肠癌标志物KRAS-G12D的PAP探针包括SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示的核酸序列；检测KRAS-G12C的PAP探针包括SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:12所示的核酸序列；检测KRAS-G13D的PAP探针包括SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示的核酸序列；检测KRAS-Q61H的PAP探针包括SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示的核酸序列；检测NRAS-Q61K的PAP探针包括SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示序列的核酸序列；检测NRAS-Q61R的PAP探针包括SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示的核酸序列；检测NRAS-G12D的PAP探针包括SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22所示的核酸序列；检测BRAF-V600E的PAP探针包括SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示的核酸序列。

5.按照权利要求4所述的探针，其特征在于，所述PAP探针的3’端碱基进行双脱氧修饰。

6.权利要求1或2所述的结直肠癌诊断标志物或在制备检测或诊断结直肠癌试剂中的用途。

7.权利要求4所述的探针或引物在制备检测或诊断结直肠癌试剂中的用途。

8.一种结直肠癌的检测试剂盒，包括DNA聚合酶、Na₄PPi、dNTPs、荧光染料、缓冲液和PAP检测探针；其中，所述的PAP检测探针是权利要求4所述的探针中的任何一种。

9.按照权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，还含有荧光染料、二甲基亚砜、阳性模板以及阴性模板；其中，所述阳性模板为含有权利要求1所述结直肠癌诊断标志物的DNA的质粒，所述阴性模板为含有权利要求1所述结直肠癌诊断标志物的野生型DNA的质粒。

10.按照权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于，结直肠癌诊断标志物KRAS-G12D的野生型DNA包括SEQ ID NO:25所示的核酸序列；结直肠癌诊断标志物KRAS-G12C的野生型DNA包括SEQ ID NO:26所示的核酸序列；结直肠癌诊断标志物KRAS-G13D的野生型DNA包括SEQ ID NO:27所示的核酸序列；结直肠癌诊断标志物KRAS-Q61H的野生型DNA包括SEQ IDNO:28所示的核酸序列；结直肠癌诊断标志物NRAS-Q61K的野生型DNA包括SEQ ID NO:29所示的核酸序列；结直肠癌诊断标志物NRAS-Q61R的野生型DNA包括SEQ ID NO:30所示的核酸序列；结直肠癌诊断标志物NRAS-G12D的野生型DNA包括SEQ ID NO:31所示的核酸序列；结直肠癌诊断标志物BRAF-V600E的野生型DNA包括SEQ ID NO:32所示的核酸序列。