[发明专利]获得肽的方法

权利要求书

1.一种从原核细胞和/或真核细胞获得肽的方法，所述方法包括以下步骤：

a)裂解原核细胞和/或真核细胞并且回收由此获得的蛋白质，

b)使用至少一种变性剂使所述蛋白质变性，

c)使用至少一种烷基化剂使变性的蛋白质烷基化，

d)使用至少一种蛋白水解酶将在步骤c)结束时获得的蛋白质酶促蛋白水解，

e)回收在酶促蛋白水解步骤d)结束时获得的肽，

其中步骤a)中所述原核细胞和/或真核细胞的裂解是在低浓度离液剂下的裂解，

其中步骤a)-d)同时进行，

其中所述在低浓度离液剂下的裂解是通过借助于超声波探头进行的声处理的裂解，

其中：

-所述变性剂是选自三(2-羧乙基)膦和二硫苏糖醇的硫醇还原剂，并且

-所述烷基化剂是碘乙酰胺；

所述方法在大气压力下进行。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)-d)在相同容器中进行。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述在低浓度离液剂下的裂解在小于或等于1M、优选地小于或等于100mM的离液剂浓度下进行。

4.根据权利要求1到3中的一项所述的方法，其中所述在低浓度离液剂下的裂解在不存在非盐离液剂比如尿素时进行。

5.根据权利要求1到4中的一项所述的方法，其中所述超声波探头在通过声处理裂解之前不经受预热步骤。

6.根据权利要求1到5中的一项所述的方法，其中所述蛋白水解酶是丝氨酸蛋白酶，其优选地选自由胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶组成的组，有利地，所述蛋白水解酶是胰蛋白酶。

7.根据权利要求1到6中的一项所述的方法，其中对应于所述蛋白水解步骤d)的最小持续时间为大约15分钟。

8.一种分析原核细胞和/或真核细胞的肽的方法，所述方法包括以下步骤：

i)使用根据权利要求1到7中的一项所述的方法从所述原核细胞和/或真核细胞获得肽，

ii)分析由此获得的所述肽，所述分析使用质谱类型的分析方法进行。