[发明专利]抗肠菌素单克隆抗体mAb4及其在肠菌素检测中的应用

说明书

本发明涉及肠杆菌科细菌分泌产物的检测，具体涉及抗肠菌素单克隆抗体mAb4及其在肠菌素检测中的应用。所述抗肠菌素单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.21016的杂交瘤细胞所分泌。基于所述抗肠菌素单克隆抗体，本发明建立了一种快速检测基质中肠菌素含量的方法，该方法具有快速便捷、特异性强、准确性高、重现性好的优点。本发明实现了对肠菌素的快速定量检测，为畜禽肠道病原细菌感染的防控提供了技术支持。

技术领域

本发明涉及肠杆菌科细菌分泌产物的检测，具体涉及抗肠菌素单克隆抗体mAb4及其在肠菌素检测中的应用。

背景技术

细菌侵入宿主肠道定植的过程中，离不开一些关键因子来克服苛刻的生长环境，比如细菌生长必需的营养因子--铁离子，在健康宿主肠道中的浓度约为10^-24M，而细菌生长所需的浓度为10^-5～10^-7M。铁载体是细菌分泌的一种小分子化合物(1.0kDa)，对三价铁离子表现出高度的亲和力，因此，为在缺铁环境下捕获生长所需的铁离子，细菌利用铁载体对铁进行转运。

肠菌素(Enterobactin，Ent)是一种主要由肠杆菌科细菌分泌的分子量为670Da的小分子化合物，是目前已知对铁亲和力最高的铁载体(Kd＝10^-49M)。肠菌素介导的铁摄取系统在肠道病原细菌定植宿主肠道过程中发挥关键作用，如鼠伤寒沙门氏菌可滞留在小鼠单核细胞中，并引发系统性持续感染，而这种感染依赖于铁转运蛋白FepBDGC和肠菌素对铁的转运，同时协助沙门氏菌逃避巨噬细胞的免疫作用；空肠弯曲菌自身不能分泌肠菌素，但同样可利用肠菌素介导的铁摄取系统来促进其在宿主肠道中定植和致病。因此，肠菌素含量对病原菌在宿主肠道内的生长和定植具有重要影响。目前还缺少一种快速准确检测肠菌素含量的方法。

发明内容

本发明旨在制备抗肠菌素单克隆抗体，并基于此建立可以定量检测基质中肠菌素含量的快速检测方法。通过对肠菌素的定量检测，同时分析肠道病原菌定植情况，以实现将肠菌素含量作为指示肠道内病原细菌定植水平的标识物，为畜禽肠道病原细菌感染的防控提供技术支持。

本发明提供一种抗肠菌素单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.21016的杂交瘤细胞所分泌。

分泌所述的抗肠菌素单克隆抗体的杂交瘤细胞株也属于本发明的保护范围，其保藏编号为CGMCC No.21016。

本发明还提供用于定量检测肠菌素的ELISA试剂盒，其包含权利要求1所述的抗肠菌素单克隆抗体。

优选地，所述试剂盒还包含肠菌素-BSA偶联物；所述肠菌素-BSA偶联物被预先包被在酶标板上或用于临用前包被在酶标板上，包被浓度为1ng/μL；所述抗肠菌素单克隆抗体的工作浓度为11.72ng/mL。

优选地，所述肠菌素-BSA偶联物的包被缓冲液为0.05mol/L，pH 9.6的碳酸盐缓冲液。

优选地，所述试剂盒还包含肠菌素标准品、酶标的抗小鼠二抗、封闭液、洗涤液、显色液和/或终止液。

优选地，所述试剂盒还包含用于稀释肠菌素标准品和抗肠菌素单克隆抗体的竞争反应液；所述竞争反应液为0.05mol/L，pH 9.6的碳酸盐缓冲液，含5％(v/v)小牛血清，离子浓度为0，并且不添加有机溶剂。

优选地，所述封闭液含有Na₂HPO₄ 5.80g/L，NaH₂PO₄ 0.593g/L，蔗糖50.00g/L，5％(v/v)小牛血清，和0.02％(v/v)Proclin 300。