[发明专利]抗肠菌素单克隆抗体mAb4及其在肠菌素检测中的应用

权利要求书

1.抗肠菌素单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.21016的杂交瘤细胞所分泌。

2.分泌权利要求1所述的抗肠菌素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCCNo.21016。

3.用于定量检测肠菌素的ELISA试剂盒，其包含权利要求1所述的抗肠菌素单克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含肠菌素-BSA偶联物；所述肠菌素-BSA偶联物被预先包被在酶标板上或用于临用前包被在酶标板上，包被浓度为1ng/μL；所述抗肠菌素单克隆抗体的工作浓度为11.72ng/mL。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述肠菌素-BSA偶联物的包被缓冲液为0.05mol/L，pH 9.6的碳酸盐缓冲液。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含肠菌素标准品、酶标的抗小鼠二抗、封闭液、洗涤液、显色液和/或终止液。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含用于稀释肠菌素标准品和抗肠菌素单克隆抗体的竞争反应液；所述竞争反应液为0.05mol/L，pH 9.6的碳酸盐缓冲液，含5％(v/v)小牛血清，离子浓度为0，并且不添加有机溶剂。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述封闭液含有Na₂HPO₄ 5.80g/L，NaH₂PO₄ 0.593g/L，蔗糖50.00g/L，5％(v/v)小牛血清，和0.02％(v/v)Proclin 300。

9.一种快速检测基质中肠菌素含量的方法，其特征在于：使用权利要求3-8任一所述的试剂盒，通过间接竞争ELISA方法检测基质中肠菌素的含量。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)将1ng/μL的肠菌素-BSA偶联物溶液加入酶标板中，100μL/孔，孵育；洗酶标板，拍干；

(2)加入封闭液，孵育；洗酶标板，拍干；

(3)使用竞争反应液配制梯度浓度的肠菌素标准品溶液以及浓度为11.72ng/mL的抗肠菌素单克隆抗体溶液；在酶标板上设置对照孔、标准品孔和样品孔，对照孔中不加样，向各个标准品孔中分别加入等体积的梯度浓度的肠菌素标准品溶液，向样品孔中加入等体积的待测基质，最后向所有微孔中加入等体积的抗肠菌素单克隆抗体溶液；用盖板膜封板，25℃反应90min；洗酶标板，拍干；

(4)加入酶标记的抗小鼠二抗，孵育；洗酶标板，拍干；

(5)加入显色液，孵育；

(6)加入终止液，混匀后在450nm/630nm波长下检测每孔吸光度值；

(7)以肠菌素标准品溶液的浓度为横坐标，以抑制率(B/B₀)为纵坐标，绘制标准曲线；其中B₀为对照孔的OD_450nm-OD_630nm值，B为各个标准品孔的OD_450nm-OD_630nm值；将样品孔的OD_450nm-OD_630nm值代入标准曲线中，计算得到待测基质中肠菌素的含量。