[发明专利]一种从血浆样本中选择性提取磷脂的方法及磷脂检测方法

说明书

本发明公开了一种从血浆样本中选择性提取磷脂的方法及磷脂检测方法，其提取方法，包括以下步骤：a.从血浆中提取总脂质残留物；b.使用10％重量百分比的TiO₂/KCC‑1核壳微球作为吸附剂，利用固相萃取法吸附总脂质中的磷脂；c.从吸附剂上洗脱磷脂，并在真空下干燥得到纯化磷脂。本发明的方法能够更快速精准地从血浆中纯化磷脂，并进一步地能对磷脂进行表征和定量检测。

技术领域

本发明涉及一种从血浆样本中选择性提取磷脂的方法及磷脂检测方法，属于生物医学技术领域。

背景技术

磷脂是一类两性脂质，其分子具有一个极性包含磷酸基团的“头部”和两个非极性脂肪酸尾部，由一个甘油分子连接。除了作为细胞膜的主要成分外，磷脂在许多细胞过程中发挥着重要作用。目前，血清磷脂已被不断证明与包括心血管疾病和癌症在内的一些复杂疾病的病因有关。因此，作为多不饱和脂肪酸的重要资源，源自膳食摄入和控制内源性代谢的酶的血清磷脂的可用性对健康具有重要意义。代谢组学技术的最新发展为识别不同疾病的血浆生物标志物提供了新的见解。越来越多的证据表明，包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)和鞘磷脂(SM)在内的血浆磷脂物质在缺血性中风的不同方面发挥着重要作用。但是，血浆中的脂类物质复杂多样，目前也缺乏一种高精度的有效检测方法，所以目前的研究也无法明确磷脂与健康的直接关联。

为了能够进一步研究磷脂在人体特定疾病间的潜在作用，更便捷、精准的磷脂提取方法及检测方法显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种从血浆样本中选择性提取磷脂的方法及磷脂检测方法。该方法能够更快速精准地从血浆中纯化磷脂，并进一步地能对磷脂进行表征和定量检测。

本发明的技术方案：一种从血浆样本中选择性提取磷脂的方法，包括以下步骤：

a.从血浆中提取总脂质残留物；

b.使用10％重量百分比的TiO₂/KCC-1核壳微球作为吸附剂，利用固相萃取法吸附总脂质中的磷脂；

c.从吸附剂上洗脱磷脂，并在真空下干燥得到纯化磷脂。

上述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法中，所述步骤a的具体方法是：

在每100μL血浆样品中混入1.5mL体积比为2:1的氯仿/甲醇溶液，得到混合物，将混合物进行2分钟的涡旋振荡后超声处理15分钟，然后在8℃中以12 000g离心5分钟，去除混合物中的不溶部分，再重复进行一个和前面相同的涡旋振荡、超声处理和离心之后，将0.2mL水加入混合物中以诱导相分离，并分离得到下层有机相，对下层有机相进行真空蒸发冷冻干燥，得到总脂质残留物，在进一步制备前储存在-80℃。

前述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法中，所述步骤b的具体步骤是:

在SPE柱内填充10％重量百分比的TiO₂/KCC-1核壳微球，依次用甲醇和0.1％FA活化，将总脂质残留物与100μL Folch溶液(即体积比为2:1的氯仿/甲醇溶液)一起通过SPE柱，上样后，用体积比为2:1的氯仿/2-丙醇和质量百分比为10％的甲醇水溶液洗涤SPE柱以去除脂肪酸和所有其他不含磷酸基团的脂质。

前述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法中，所述10％重量百分比的TiO2/KCC-1核壳微球的制备方法为：

在每30mL的水中加入1.10g氯化十六烷吡啶和0.60g中，在搅拌下加入0.94mL异丙醇和30mL环己烷，然后，使用注射器将正硅3mL酸乙酯滴加到混合物中，将均一的混合物在室温下剧烈搅拌30分钟，加热至70℃，并保持20小时，反应后，将溶液以8000g离心10分钟，残留物依次用丙酮、去离子水和乙醇洗涤三次，然后真空干燥12小时，最后，通过在马弗炉中在500℃下从二氧化硅纳米颗粒中去除表面活性剂4小时获得KCC-1粉末；