[发明专利]一种从血浆样本中选择性提取磷脂的方法及磷脂检测方法

权利要求书

1.一种从血浆样本中选择性提取磷脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.从血浆中提取总脂质残留物；

b.使用10％重量百分比的TiO₂/KCC-1核壳微球作为吸附剂，利用固相萃取法吸附总脂质残留物中的磷脂；

c.从吸附剂上洗脱磷脂，并在真空下干燥得到纯化磷脂。

2.根据权利要求1所述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法，其特征在于，所述步骤a的具体方法是：

在每100μL血浆样品中混入1.5mL体积比为2:1的氯仿/甲醇溶液，得到混合物，将混合物进行2分钟的涡旋振荡后超声处理15分钟，然后在8℃中以12 000g离心5分钟，去除混合物中的不溶部分，再重复进行一个和前面相同的涡旋振荡、超声处理和离心之后，将0.2mL水加入混合物中以诱导相分离，并分离得到下层有机相，对下层有机相进行真空蒸发冷冻干燥，得到总脂质残留物，在进一步制备前储存在-80℃。

3.根据权利要求1所述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法，其特征在于,所述步骤b的具体步骤是:

在SPE柱内填充10％重量百分比的TiO₂/KCC-1核壳微球，依次用甲醇和0.1％FA活化，将总脂质残留物与100μLFolch溶液一起通过SPE柱，上样后，用体积比为2:1的氯仿/2-丙醇和质量百分比为10％的甲醇水溶液洗涤SPE柱以去除脂肪酸和所有其他不含磷酸基团的脂质。

4.根据权利要求3所述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法，其特征在于，所述10％重量百分比的TiO₂/KCC-1核壳微球的制备方法为：

在每30mL的水中加入1.10g氯化十六烷吡啶和0.60g中，在搅拌下加入0.94mL异丙醇和30mL环己烷，然后，使用注射器将正硅3mL酸乙酯滴加到混合物中，将均一的混合物在室温下剧烈搅拌30分钟，加热至70℃，并保持20小时，反应后，将溶液以8000g离心10分钟，残留物依次用丙酮、去离子水和乙醇洗涤三次，然后真空干燥12小时，最后，通过在马弗炉中在500℃下从二氧化硅纳米颗粒中去除表面活性剂4小时获得KCC-1粉末；

将2.20g钛酸四丁酯分散到8.80mL乙醇中，将溶液密封并在涡旋下振荡5分钟，然后，在搅拌下将混合物加入KCC-1粉末中直至干燥，将干燥的固体材料加热至100℃，保持6小时，然后，将1g加热后的固体材料放入装有20mL水的高压釜中，在60℃下保持5小时，最后，将干燥后的样品在马弗炉中在600℃下热处理5小时，以获得10％重量百分比的TiO2/KCC-1核壳微球。

5.根据权利要求1所述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法，其特征在于,所述步骤c的具体步骤是:

使用体积比为1:2的氯仿/甲醇从SPE柱上洗脱目标磷脂，并在真空下干燥，将获得的磷脂残留物重新溶解在500μL的Folch溶液中，并在进行H磷脂C-MS分析之前用0.22μm PTFE膜过滤。

6.根据权利要求1所述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法，其特征在于：所述步骤b中固相萃取法使用的SPE柱为单体增压式SPE柱，其结构包括柱体(1)，柱体(1)一端设有可拆卸连接的压力塞；所述压力塞包括与柱体(1)的管口进行密封连接的盖体(2)，盖体(2)上端设有中空结构(5)，中空结构(5)内设有伸缩气室(3)，伸缩气室(3)下端通过盖体(2)上的气孔(201)与柱体(1)连通；所述伸缩气室(3)上端设有拉板(4)，伸缩气室(3)上设有两端分别连接拉板(4)和盖体(2)的拉伸弹簧；所述中空结构(5)两侧开设有滑槽(501)，拉板(4)上设有穿过滑槽(501)并突出至中空结构(5)外的把手(401)。

7.根据权利要求6所述的从血浆样本中选择性提取磷脂的方法，其特征在于：所述中空结构(5)顶部设有旋转挡板(6)；旋转挡板(6)上端设有旋钮(601)，两端设有凸耳(602)；中空结构(5)上设有与凸耳(602)对应的横向限位槽，使凸耳(602)能在横向限位槽限定的角度内进行旋转；所述把手(401)上端设有与凸耳(602)对应的挂钩(402)。