[发明专利]检测血液中多种类固醇激素的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了检测血液中多种类固醇激素的方法，包括，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过前处理的血液中DHEA、DHT、P5、17OHP5；S1、利用高效液相色谱将DHEA、DHT、P5、17OHP5与干扰物分离；S2、利用同位素内标法定量；S3、以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立标准曲线，计算待测样本中DHEA、DHT、P5、17OHP5的含量。一种试剂盒，包括如下试剂：流动相，所述流动相包括流动相A和流动相B；流动相A：体积比为0.1％甲酸水溶液；流动相B：乙腈，色谱纯。本发明特异性强，灵敏度高，前处理过程较简单，精密度和加标回收率都基本符合要求，可以用于分析血液中4种离子化效率低下的类固醇激素含量。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及检测血液中多种类固醇激素的方法及试剂盒。

背景技术

类固醇激素又称甾体激素，是一类四环脂肪烃化合物，具有环戊烷多氢菲母核。人类固醇激素主要可分为肾上腺皮质激素和性激素两大类，在人体机能发展和代谢循环等方面中具有重要生理作用。

通常，检测血液中的类固醇含量一般使用免疫法，但免疫法在分析小分子化合物时，很容易受内源性结构类似物的干扰而发生交叉反应使得检测结果发生难以预料的偏离。近年来，液相色谱串联质谱技术以其高灵敏度和高特异性等优点在人内源性类固醇激素的分析检测中得到越来越广泛地应用。然而在利用液相色谱串联质谱技术分析某些类固醇激素时，由于这些类固醇激素分子的离子化效率低下，使得检测灵敏度低下无法满足常规检测要求。

为此，我们提出检测血液中多种类固醇激素的方法及试剂盒来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中对血液中4中类固醇激素检测不理想的问题，而提出的检测血液中多种类固醇激素的方法及试剂盒。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

检测血液中多种类固醇激素的方法，包括采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过前处理的血液中DHEA、DHT、P5、17OHP5；

S1、利用高效液相色谱将DHEA、DHT、P5、17OHP5与干扰物分离；

S2、利用同位素内标法定量；

S3、以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立标准曲线，计算待测样本中DHEA、DHT、P5、17OHP5的含量。

优选的，高效液相色谱的具体条件为：

流动相A：体积比为0.1％的甲酸水；

流动相B：乙腈，纯度为色谱纯；浓度为100％；

色谱柱型号：Waters XBridge BEH C18，3.5μm,2.1mm*150mm；

采用梯度洗脱方式，见表1；

流速为0.2ml/min，柱温为40℃，进样体积为10μl。

表1流动相梯度洗脱参数

优选的，质谱条件为：