[发明专利]一种鉴定和筛选高苦茶碱茶树的功能标记及其应用

权利要求书

1.一种茶树苦茶碱合成酶基因功能标记，其特征在于该功能标记正向引物TcS-InDelF序列如SEQ ID No.1所示，反向引物TcS-InDelR序列如SEQ ID No.2所示。

2.如权利要求1所述的一种茶树苦茶碱合成酶基因功能标记在鉴定和筛选高苦茶碱茶树的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述高苦茶碱茶树为苦茶碱含量高于15mg·g^-1的乳源群体种及其杂交后代。

4.一种茶树苦茶碱合成酶基因功能标记在鉴定和筛选高苦茶碱茶树的应用方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)对乳源群体种及其杂交后代单株提取DNA；

(2)以步骤(1)中的各茶树材料DNA为模板，利用功能标记对茶树材料中苦茶碱合成酶基因起始密码子ATG上游-1804bp和-1199bp的启动子片段进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析，扩增产物中包含606bp的片段则确定该茶树为高苦茶碱茶树，如不含有该片段则为低苦茶碱茶树。

5.如权利要求4所述的应用方法，其特征在于所述PCR扩增反应体系及反应程序为：PCR反应体系：32.5μLddH₂O，0.5μL DNA，5μL10×Buffer，4μL25mM MgCl₂，5μL2mMdNTP，1μL KOD-Plus-Neo酶，10μM的正、反向引物各1μL；

反应程序：94℃2min，然后进行以下循环，94℃10sec，58℃25sec，68℃10sec，共30个循环，68℃延伸5min，扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳。