[发明专利]一种用于氨基糖苷类药物基因突变检测的试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于氨基糖苷类药物基因突变检测的试剂盒。该试剂盒包含线粒体基因MT‑RNR1的2个热点变异m.1494CT和m.1555AG。本发明能够低成本、精准快速、高效便捷的对m.1494CT和m.1555AG进行检测，采用的微阵列芯片技术，延续了传统基因芯片的高敏感性和特异性，易于在临床进行推广应用，能够快速在新生儿阶段对m.1494CT和m.1555AG进行筛查，有效“防”止孩子“一针致聋”的发生。

技术领域

本发明属于基因检测领域，具体涉及一种用于氨基糖苷类药物基因突变检测的试剂盒。

背景技术

氨基糖苷类药物包括庆大霉素、链霉素、卡那霉素等等，在临床上主要用于治疗革兰氏阴性菌引起的感染和结核杆菌感染，其药物作用机理是直接与细菌的16S rRNA结合，导致细菌蛋白翻译错误或者蛋白质合成提前终止而达到抗菌效果。研究显示，部分携带有12S rRNA基因 m.1494CT和m.1555AG突变的儿童，其12S rRNA的二级结构发生与细菌16SrRNA相同的变化，当使用正常剂量或者微量的氨基糖苷类药物时，会结合人体的12S rRNA，耳细胞线粒体蛋白质合成异常，减少ATP的合成量，进一步无法维持内耳的离子梯度，造成血管纹、内淋巴液、毛细胞内的离子浓度不平衡，最终导致毛细胞的死亡，诱导耳聋的发生，造成永久性听力损伤。并且这两个突变位点对氨基糖苷类药物的毒副作用极其敏感，还可以引起耳蜗、前庭等关键性听力器官发生严重“病变”，导致不可挽回的损害。

由于氨基糖苷类药物常在儿童身上使用，我国每年有2~3万儿童因此而致聋，给无数家庭带来了终身的遗憾。由于携带这两个基因突变的孩子在用药前没有任何症状，要避免“一针致聋”的唯一途径在于“防”，即通过基因检测提前确定是否携带这两个突变，越早发现越好，从而在今后的人生中避免服用此类药物。

目前的检测方法有很多，包括Sanger测序、荧光定量PCR、核酸质谱、测序法和基因芯片。从专利情况看，PCR类方法为主，CN107881229A、CN112852948A以及CN111172250A等公布了基于PCR设计引物的方法检测这两个突变，确实操作简便，效率高、成本低，但判读结果容易受样本浓度、纯度等因素的影响，而且检测样本数受检测通道限制。Sanger法为低通量技术手段，一次只能检测少量样本，不利于高效筛查这两个突变。测序法可以进行高通量的基因检测，结果准确，但测序成本较高，结果的判读还存在困难，不适合临床推广。传统点样法制成的基因芯片法具有高通量的优点，但易出现假阳性、假阴性等缺点。

因此临床上需要一种低成本、精准快速、高效便捷、易于推广的试剂盒，在新生儿阶段对氨基糖苷类药物基因突变位点m.1494CT和m.1555AG进行快速、准确检测，有效“防”止孩子“一针致聋”的发生。

发明内容

鉴于现有基因突变检测手段存在的问题，本发明提供了一种针对氨基糖苷类药物基因突变m.1494CT和m.1555AG的检测试剂盒，采用微阵列芯片法进行试剂盒的发明。

具体的，本发明所述试剂盒包括氨基糖苷类药物相关基因MT-RNR1上的两个突变位点m.1494CT和m.1555AG。

所述突变位点每个设计1个探针，正义链和反义链方向均可设计。

进一步的，所述探针序列如SEQ ID No.1~ SEQ ID No.2所示（表1），用于杂交捕获这两个突变位点。

表1氨基糖苷类药物基因突变探针