[发明专利]一种提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法

权利要求书

1.一种提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：先配制含有不同浓度梯度的餐厨废弃油脂的液体培养基，加质量体积比为1.8-2.3％琼脂制备成固体培养基，将活化后的汉逊德巴利酵母菌株依次接种到上述不同浓度梯度的固体培养基上进行传代培养，培养温度为30-32℃，逐步提高菌株同化甘油的能力，经驯化得到能在含餐厨废弃油脂的培养基上生长的汉逊德巴利酵母菌株；其中，所述液体培养基中含餐厨废弃油脂的浓度分别为100.0g/L、150.0g/L、200.0g/L、250.0g/L、300.0g/L、400.0g/L和500.0g/L；

S2：经步骤S1驯化后的汉逊德巴利酵母菌株按照接种量为2.3-5％接种于含有餐厨废弃油脂的发酵培养基中，在30-32℃、200-285r/min的条件下进行液体培养，发酵完成后过滤，分别收集菌体和发酵液，测定菌体质量和发酵液中3-羟基丙酸的含量。

2.如权利要求1所述的提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，S1中液体培养基中还包括如下组分：葡萄糖5-8g/L、酵母浸膏6-10g/L、(NH₄)₂SO₄ 5-8g/L、KH₂PO₄ 6-8g/L、MgSO₄·7H₂O 0.05-0.15g/L、FeSO₄·7H₂O 0.01-0.02g/L、TES 3.5mL，pH6.0-6.5。

3.如权利要求1所述的提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，S2中发酵培养基包括以下组分：200.0-300.0g/L餐厨废弃油脂、葡萄糖10.0-15.8g/L、酵母膏5.0-7.6g/L、(NH₄)₂SO₄ 10.0-15.0g/L、KH₂PO₄2.0-3.25g/L、MgSO₄·7H₂O 1.25-2.0g/L、FeSO₄·7H₂O 0.01-0.03g/L、丙酸10.0-12.0g/L、TES 3.5mL，pH6.0-6.5。

4.如权利要求1所述的提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，S1和S2中培养时间分别为48h和5天。

5.如权利要求1所述的提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，所述餐厨废弃油脂在使用前先在50-80℃处理20-30min，过滤去除不溶物，然后在收集的滤液中添加质量体积比为(0.05-0.1)g：1L灭菌的活性炭。

6.如权利要求1所述的提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，S2中，发酵培养时，所述发酵培养基中的餐厨废弃油脂和葡萄糖分别均分为三份，并分别于0h、48h和60h分批加入，其他成分均在0h时一次性加入。

7.如权利要求1所述的提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，活化培养基包括以下组分：葡萄糖20.0g/L、酵母浸膏10.0g/L、蛋白胨20.0g/L、琼脂20.0g/L。

8.如权利要求1所述的提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，所述汉逊德巴利酵母菌株保藏号为：CGMCC No.11893。

9.如权利要求2或3所述的提高3-羟基丙酸产率的微生物制备方法，其特征在于，所述TES包括以下组分：HCl 1.0-2.35g/L、H₃BO₄ 0.45-0.50g/L、NaMoO₄·KH₂PO₄ 0.01-0.25g/L、CuCl₂·6H₂O 0.25-0.35g/L、ZnSO₄·7H₂O0.01-0.05g/L、MnSO₄ 0.01-0.02g/L、NiCl₂·6H₂O0.01-0.02g/L、CuSO₄·5H₂O0.05-0.1g/L。