[发明专利]用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR引物组合和多重PCR试剂盒及检测方法

权利要求书

1.用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR引物组合，其特征在于，包括：

①用于特异性扩增杂色曲霉素A脱氢酶基因ver-1的引物对，该引物对包括具有如SEQID No.1所示核苷酸序列的上游引物，以及具有如SEQ ID No.2所示核苷酸序列的下游引物；

②用于特异性扩增杂色曲霉素B基因verB的引物对，该引物对包括具有如SEQ ID No.3所示核苷酸序列的上游引物，以及具有如SEQ ID No.4所示核苷酸序列的下游引物；

③用于特异性扩增真菌ITS序列的引物对。

2.如权利要求1所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR引物组合，其特征在于，包括：

①用于特异性扩增杂色曲霉素A脱氢酶基因ver-1的引物对，该引物对包括：

上游引物；5′-GTGACCCCAGAAGTATGAAC-3′；

下游引物：5′-GGGAACCCAACAAGACGC-3′；

②用于特异性扩增杂色曲霉素B基因verB的引物对，该引物对包括：

上游引物；5′-GGGACAAGGTTCTAGTGAAG-3′；

下游引物：5′-CGATGACGGCAGTAAGGT-3′；

③用于特异性扩增真菌ITS序列的引物对。

3.如权利要求2所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR引物组合，其特征在于，用于特异性扩增真菌ITS序列的引物对包括：

上游引物；5′-AGAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG-3′；

上游引物；5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′。

4.如权利要求1所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR引物组合，其特征在于，所述的黄曲霉素产毒菌包括黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)和米曲霉(Aspergillus oryzae)中的至少一种。

5.用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR试剂盒，其特征在于，含有如权利要求1-4中任意一项所述的快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR引物组合。

6.如权利要求5所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR试剂盒，其特征在于，50μL的多重PCR反应体系中含有：5μM的引物对各3-5μL，2.5mmol/L的dNTPs 3-7μL，2.5mmol/L的Mg²⁺3-5μL，DNA模板浓度不小于1ng/μL，余量为去离子水。

7.如权利要求6所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR试剂盒，其特征在于，50μL的多重PCR反应体系中含有：5μM的引物对各3μL，2.5mmol/L的dNTPs 5μL，2.5mmol/L的Mg²⁺4μL，DNA模板浓度10ng/μL，余量为去离子水。

8.快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样品的总DNA，作为模板DNA；

(2)采用如权利要求5-7中任意一项所述的用于快速检测黄曲霉素产毒菌的多重PCR试剂盒对所述的模板DNA进行多重PCR扩增；

(3)对扩增产物进行检测，并根据检测结果判断待测样品中是否含有黄曲霉素产毒菌。

9.如权利要求8所述的快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的多重PCR扩增的退火温度为54-60℃。

10.如权利要求9所述的快速检测黄曲霉素产毒菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的多重PCR扩增的退火温度为56℃。