[发明专利]一种腺苷注射液的高效液相色谱检测方法

说明书

本发明涉及一种腺苷注射液的高效液相色谱检测方法，所述方法包括以下色谱条件：采用阳离子交换色谱柱，以pH为2.00～5.00的缓冲盐水溶液作为流动相进行洗脱。本发明的检测方法可以更加全面地分析和检测腺苷注射液中的有关物质，能够同时检测腺嘌呤、腺苷酸2个已知杂质以及制剂灭菌工艺所产生的未知杂质。本发明的检测方法可以用于对腺苷注射液灭菌工艺所产生的杂质进行有效控制，对于腺苷注射液制剂工艺及产品质量的提高具有极其重要的意义。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种腺苷注射液的高效液相色谱检测方法。

背景技术

腺苷是经典的腺苷受体激动剂，临床应用于冠状动脉介入手术(PCI)术中防治无复流现象，减少缺血再灌注损伤；治疗阵发性室上性心动过速；超声心动图试验，诊断冠心病；临床也常用于核素心肌灌注显像(MPI)。腺苷注射液的临床价值明确，拥有全球多国指南共识的推荐，尤其是在心脏负荷超声试验，腺苷临床地位不可替代。

腺苷的化学名称为6-氨基-9-β-D-呋喃核糖基-9-H-嘌呤，分子式为C₁₀H₁₃N₅O₄，结构如下：

腺苷注射液的有关物质检测方法，根据2020版中国药典，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(用2mol/L氢氧化钾调节pH值至5.7)－甲醇(85：15)为流动相等度洗脱，只控制了腺苷注射液中的已知杂质—腺嘌呤。采用2020版中国药典中的腺苷注射液有关物质检测方法对腺苷注射液进行研究发现，制剂在灭菌前后溶剂前沿峰不一致，且不同生产批次之间有增大趋势。

因此，检测出腺苷注射液灭菌工艺所产生的、在C18色谱柱上不保留的杂质，成为一个亟待解决的问题。

发明内容

本发明提供了一种能够更加全面分析腺苷注射液的高效液相色谱检测方法，该方法能够同时检测腺嘌呤、腺苷酸2个已知杂质以及制剂灭菌工艺所产生的未知杂质。

本发明提供的腺苷注射液的高效液相色谱检测方法包括如下色谱条件：

采用阳离子交换色谱柱，以pH为2.00～5.00的缓冲盐水溶液作为流动相进行洗脱。

在本发明所述的高效液相色谱检测方法中，优选地，所述阳离子交换色谱柱为磺酸基阳离子交换色谱柱。

在本发明所述的高效液相色谱检测方法中，所述缓冲盐水溶液可以为磷酸盐水溶液、甲酸盐水溶液或醋酸盐水溶液；其中，优选地，所述缓冲盐水溶液为磷酸盐水溶液。所述磷酸盐水溶液可以为磷酸钾水溶液、磷酸二氢钾水溶液、磷酸氢二钾水溶液、磷酸钠水溶液、磷酸二氢钠水溶液、磷酸氢二钠水溶液、磷酸铵水溶液、磷酸二氢铵水溶液或磷酸氢二铵水溶液；其中，优选地，所磷酸盐水溶液为磷酸二氢铵水溶液；所述甲酸盐水溶液可以为甲酸钠水溶液或甲酸铵水溶液；所述醋酸盐水溶液可以为醋酸钠水溶液或醋酸铵水溶液。

在本发明所述的高效液相色谱检测方法中，优选地，所述磷酸盐水溶液采用磷酸调节至pH为2.00～5.00，优选为2.00～3.00；优选地，所述甲酸盐水溶液采用甲酸调节至pH为2.00～5.00，优选为3.00～4.00；优选地，所述三氟乙酸水溶液采用醋酸、三氟乙酸或盐酸调节至pH为2.00～5.00，优选为3.50～5.00。

在本发明所述的高效液相色谱检测方法中，所述缓冲盐水溶液的浓度可以为1.0～3.0％(质量体积比，W/V)。

在本发明所述的高效液相色谱检测方法中，所述色谱条件还可以包括：所述洗脱采用等度洗脱；检测波长为255nm～280nm；流速为0.3～1.0ml/min；柱温为20～40℃；进样量为20μl；优选地，检测波长为260nm，流速为0.5～0.7ml/min。