[发明专利]一种核酸等温扩增检测试剂、试剂盒、检测系统及方法

说明书

本发明公开了一种核酸等温扩增检测试剂、试剂盒、检测系统及方法，该试剂为冻干粉末态，其包括缓冲液、MgCl₂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、UNG酶、Bst DNA聚合酶、逆转录酶、海藻糖、蔗糖、甘露醇、Tween20、盐酸胍、及待检病毒的LAMP的引物组合物。本发明采用了适合样本直接扩增的体系，能够裂解病原体，释放其基因组核酸，且提供一个耐抑制缓冲体系，达到免核酸提取的效果，同时实现了试剂冻干后常温保存，减少冷链运输弊端，本发明提供的检测系统将该检测试剂与本发明提供的具有反射镜的可视化核酸等温扩增装置检测设备结合，实现了样本进，结果出，快速便捷。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种核酸等温扩增检测试剂、试剂盒、检测系统及方法。

背景技术

环介导等温扩增(LAMP)技术的特点是针对靶基因的特定领域设计特异性引物，利用链置换DNA聚合酶在恒温条件下保温几十分钟，即可实现核酸的扩增。LAMP法不需要模板的热变性、长时间温度循环、繁琐的电泳、紫外观察等过程，在食品微生物检测及临床医学上传染性疾病、转基因食品和胚胎性别坚定等特性的诊断上都具有独特的应用价值，使得人们对病原体的检测诊断得以快速并高通量的实现。

核酸等温扩增技术在实际应用当中容易遇到抑制现象。采样方法、样本类型、提取试剂、提取方法等均影响得到的DNA或RNA模板的质量，导致不同程度的扩增抑制，且目前多数现有技术采用先提取后反应的两步法，操作不便。

发明内容

本发明的目的是提供一种耐抑制性好、操作简便的新型核酸等温扩增检测试剂、等温核酸扩增方法及其应用。

为实现本发明的目的，

本发明提供了一种核酸等温扩增检测试剂，所述核酸等温扩增检测试剂为冻干粉末态，其由以下原料冻干制成：

缓冲液、MgCl₂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、UNG酶、Bst DNA聚合酶、逆转录酶、海藻糖、蔗糖、甘露醇、Tween 20、盐酸胍、及待检病毒的LAMP的引物组合物。

进一步地，所述检测试剂还包括可视化显色剂。

可选地，所述待检病毒为博卡病毒，所述引物组合物包括SEQ ID NO.1-6所示的引物。

可选地，所述待检病毒为呼吸道合胞病毒，所述引物组合物包括SEQ ID NO.7-12所示的引物。

可选地，所述待检病毒为新型冠状病毒，所述引物组合物包括SEQ ID NO.13-24所示的引物

本发明还提供了一种核酸等温扩增检测试剂盒，其含有上述的检测试剂。

本发明还提供了一种核酸等温扩增检测系统，其包括：

预装有核酸等温扩增检测试剂的反应管，所述核酸等温扩增检测试剂为冻干粉末态，其由以下原料冻干制成：缓冲液、MgCl₂、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、UNG酶、Bst DNA聚合酶、逆转录酶、海藻糖、蔗糖、甘露醇、Tween 20、盐酸胍、显色剂、及待检病毒的LAMP的引物组合物；

可视化核酸等温扩增装置，所述装置包括壳体和设置在所述壳体内的加热座，所述加热座内设有由上至下贯穿所述加热座的反应管固定孔，所述反应管固定孔用于放置所述反应管，所述壳体包括相互连接的上盖和下壳体，所述下壳体内装设有反射镜，所述反射镜设置在所述反应管固定孔的下方以供观察反应管内反应溶液的颜色；所述下壳体表面还设有观察窗，所述观察窗设置在所述反射镜的外侧，所述观察窗与所述反射镜之间的夹角为0-90°。