[发明专利]鸡肠源益生乳酸菌制剂的真空冷冻干燥工艺在审
申请号: | 202111127763.9 | 申请日: | 2021-09-26 |
公开(公告)号: | CN113846030A | 公开(公告)日: | 2021-12-28 |
发明(设计)人: | 李思强;孙胜军;郑奕;王冶;周启梅;孙晨灿;黄仪;张雨蒙;王天阳;赵梓绮;陈秋鹏 | 申请(专利权)人: | 黄淮学院;平顶山大德广生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N1/04;C12M1/02;C12M1/00;B01F11/00;C12R1/01 |
代理公司: | 北京棘龙知识产权代理有限公司 11740 | 代理人: | 张开 |
地址: | 467113 *** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 鸡肠源益生 乳酸菌 制剂 真空 冷冻 干燥 工艺 | ||
本发明公开了鸡肠源益生乳酸菌制剂的真空冷冻干燥工艺;本发明,通过冷冻干燥前采取一定的保护措施,选用脱脂奶粉、海藻糖和低聚果糖作为合适的复合保护剂,以重量百分比计,复合保护剂配比为脱脂奶粉6‑18%,海藻糖6‑18%,低聚果糖1‑9%,余量为蒸馏水;将菌泥和保护剂按重量比1:4‑9进行配比,充分混匀,分装至冻干瓶中;通过在冰箱中预冻以及在真空冷冻干燥机中冻干处理后,从而能够在最大程度上减轻以及有效避免冷冻和干燥过程给细胞造成的损伤,能够有效提高菌体存活率;同时,在对菌种和保护剂进行混合时,将物料进行反复升降处理,使得物料在混料筒内具有良好的混合效果,菌泥与保护剂的接触更加充分均匀,有利于提高菌种的活性。
技术领域
本发明涉及生物制剂技术领域,尤其涉及鸡肠源益生乳酸菌制剂的真空冷冻干燥工艺。
背景技术
近年来,乳酸菌制剂的需求量在市场上逐年增大,对其活菌数质量和贮藏效果要求也越来越严格,乳酸菌制剂的保藏和制备又是其发挥诸多功效的重要保证和前提条件。在科技迅速发展的今天,真空冷冻干燥技术成为制备菌制剂和保藏微生物的有效方法,其原理是先把物料中的水分冻结成冰,之后再通过冰的升华作用去除水分。
微生物在冻干的过程中,微生物细胞和组成成分通常会受到一定的损伤,例如,蛋白质变性失活、膜通透性发生改变、DNA损伤、pH动态失衡以及生物膜脂肪酸成分发生改变;制备益生乳酸菌制剂的关键技术在于冻干保护剂的选择和使用,现有技术中的单一保护剂,在使用时,对乳酸菌冻干后的保护效果有限,无法最大限度提高菌种存活率;同时,传统的真空冷冻干燥工艺过程中,在将菌种与试剂进行混合时,混合效果不均匀,会影响菌种的活性,因此,设计鸡肠源益生乳酸菌制剂的真空冷冻干燥工艺是很有必要的。
发明内容
本发明解决的问题在于提供鸡肠源益生乳酸菌制剂的真空冷冻干燥工艺,通过冷冻干燥前采取一定的保护措施,选用脱脂奶粉、海藻糖和低聚果糖作为合适的复合保护剂,以重量百分比计,复合保护剂配比为脱脂奶粉6-18%,海藻糖6-18%,低聚果糖1-9%,余量为蒸馏水;将菌泥和保护剂按重量比1:4-9进行配比,充分混匀,分装至冻干瓶中;通过在冰箱中预冻以及在真空冷冻干燥机中冻干处理后,从而能够在最大程度上减轻以及有效避免冷冻和干燥过程给细胞造成的损伤,能够有效提高菌体存活率;同时,在对菌种和保护剂进行混合时,通过防尘箱内部的混料组件将需要混匀的物料进行混合,通过将物料进行反复升降处理,使得物料在混料筒的内部具有良好的混合效果,菌泥与保护剂的接触更加充分均匀,从而有利于提高菌种的活性。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
鸡肠源益生乳酸菌制剂的真空冷冻干燥工艺,包括以下步骤:
步骤S1:将筛选出的戊糖片球菌菌株从-80℃冰箱中取出,用接种环将该菌株接种至MRS固体培养基上,于静置培养箱中培养,温度为16℃-42℃,过夜培养;用接种环从培养后的MRS固体培养基上挑取复苏的单菌落,接种至一支含有30mLMRS液体培养基的试管中,于振荡培养箱中培养,温度为16℃-42℃,转速160-200rpm,过夜培养,用于制备菌悬液;
步骤S2:将发酵液转至灭过菌的50mL离心管中,放入离心机中进行离心,倒去上清并对菌体进行称重,得到乳酸菌的菌泥,备用;将离心后制备的乳酸菌的菌泥,进行一系列梯度稀释,即106-108倍稀释,用枪吸取200μL涂布至MRS固体培养基上,16℃-42℃过夜培养,测定其冻干前的活菌数;
步骤S3:选用脱脂奶粉、海藻糖和低聚果糖作为原料配制保护剂,以重量百分比计,保护剂中各组分的配比为脱脂奶粉6-18%,海藻糖6-18%,低聚果糖1-9%,余量为蒸馏水,配好后灭菌,备用;
步骤S4:将步骤S2得到的菌泥和步骤S3得到的保护剂按重量比1:4-9进行配比,将二者通过混匀设备进行充分混匀,分装至冻干瓶中;
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