[发明专利]专用于Diego血型基因测序的引物组及试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种专用于Diego血型基因测序的试剂盒和方法，优化选择包含突变位点的等位基因的关键片段，并加入配套的扩增试剂和纯化程序，实现对目标等位基因的桑格法测序。本发明提供的专用于Diego血型基因测序的引物组可以解决Digeo血型的抗原鉴定、疑难血型的判断、新突变位点的发现、基因多态性检测等问题。

技术领域

本发明涉及基因诊断制品技术领域，具体为一种专用于Diego血型基因测序的引物组及试剂盒和方法。

背景技术

Diego血型系统的基因是SLC4A1，该基因编码的蛋白质是阴离子交换剂家族的一部分，在红细胞质膜中表达，作为氯化物/碳酸氢盐交换剂参与二氧化碳从组织到肺的转运。SLC4A1基因位于染色体17q21.31，包含20个外显子。

Diego血型系统目前发现有23个抗原，具有重要的临床意义。血型不合会引发溶血性输血反应和新生儿溶血病，甚至危及患者生命。每个抗原对应特定的等位基因，可通过对突变位点进行检测来确定。现有技术通常通过桑格法或者高通量测序，获得Diego血型基因的目标序列，然后与标准序列进行比对。桑格法测序需要选定目标序列，设计测序引物，测序的结果片段因人而异，所测序列的质量和准确度也因待测对象和引物的不同而不同。高通量测序能够获得较长的目标序列，然而较为耗时费力，而且成本高，只有特殊样本有需求才用。

目前可供Digeo血型基因分型方法有很多可供选择，例如PCR-SSP、荧光PCR法等。但这些方法在设计引物时只能针对某些具有区别性的特异性位点进行设计，因此只能对产品检测内的特异性位点进行分型，对于一些特殊的或新的突变位点则难以明确。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术中由于基因突变的发生使得Digeo血型基因的测定困难，提供一种专用于Diego血型基因测序的引物组及试剂盒和方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

专用于Diego血型基因测序的引物组，包括14外显子扩增用引物对P1，16外显子扩增用引物对P2和19外显子扩增用引物对P3；

其中14外显子扩增用引物对P1的序列为：

P1F：ATCTTCCAGGACCACCCACT；

P1R：GAACTTGCGCAGCATCATGG。

16外显子扩增用引物对P2的序列为：

P2F：AAACTCTCGGTGCCTGATGG；

P2R：ATGGGAAACTCGGAACGCAA。

19外显子扩增用引物对P3的序列：

P3F：GCATGCACTTATTCACGGGC；

P3R：GGCACAGTGAGGATGAGGAC。

可以将这些引物组应用于制备专用于Diego血型基因测序的制品中，选择SLC4A1基因的外显子14、16、19分三段进行PCR扩增，一方面是针对Diego血型基因主要的突变位点；另一方面是缩小扩增的目标范围和序列长度，提高扩增的效率和准确度；该引物组能有效避开目前为止发现的突变位点。与其它Diego血型基因测序的引物组相比，扩增效率高，匹配准确度高，可降低检测成本。

一种人类Diego血型基因测序的试剂盒，包括上述的14外显子扩增用引物对P1，16外显子扩增用引物对P2和19外显子扩增用引物对P3、PCR扩增预混物，凝胶，凝胶稀释液，其它辅助试剂。

优选的，14外显子扩增用引物对P1，16外显子扩增用引物对P2和19外显子扩增用引物对P3的浓度10～100pM。

检测必须但试剂盒中不包括的组分：