[发明专利]专用于Diego血型基因测序的引物组及试剂盒和方法

权利要求书

1.专用于Diego血型基因测序的引物组，其特征在于，包括14外显子扩增用引物对P1，16外显子扩增用引物对P2和19外显子扩增用引物对P3；

其中14外显子扩增用引物对P1的序列如SEQ ID No.1-2所示；

16外显子扩增用引物对P2的序列如SEQ ID No.3-4所示；

19外显子扩增用引物对P3的序列如SEQ ID No.5-6所示。

2.权利要求1所述的引物组在制备专用于Diego血型基因测序的制品中的应用。

3.一种人类Diego血型基因测序的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的14外显子扩增用引物对P1，16外显子扩增用引物对P2和19外显子扩增用引物对P3、PCR扩增预混物，凝胶，凝胶稀释液。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，14外显子扩增用引物对P1，16外显子扩增用引物对P2和19外显子扩增用引物对P3的浓度10～100pM。

5.一种人类Diego血型基因测序的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、利用14外显子扩增用引物对P1，16外显子扩增用引物对P2和19外显子扩增用引物对P3分别扩增SLC4A1基因的14、16、19外显子；

S2、对扩增片段用凝胶进行纯化；

S3、用三对引物进行桑格法测序，正反向结果合并。

6.如权利要求5所述的Diego血型基因测序的方法，其特征在于，S1中扩增SLC4A1基因的14、16、19外显子时的PCR扩增程序时，变性再94℃～98℃，5～30sec下进行。

7.如权利要求6所述的Diego血型基因测序的方法，其特征在于，S1中扩增SLC4A1基因的14、16、19外显子时的PCR扩增程序为：

1 96℃6min 1循环

2 96℃15sec，68℃60sec 30循环

3 96℃20sec，65℃50sec，72℃45sec 10循环

4 72℃2min 1循环

5 4℃保存。

8.如权利要求6所述的Diego血型基因测序的方法，其特征在于，S1中扩增SLC4A1基因的14、16、19外显子时的PCR扩增程序为：

1 98℃7min 1循环

2 98℃10sec，55℃30sec，72℃40sec 30循环

3 72℃2min 1循环

4 4℃保存。

9.如权利要求5所述的Diego血型基因测序的方法，其特征在于，S2中，将扩增产物进行PCR凝胶电泳提纯，选取扩增的目标片段400bp±20bp。