[发明专利]一种d-核糖快速诱导的人肌红蛋白非酶糖基化位点的鉴定方法

权利要求书

1.一种d-核糖快速诱导的人肌红蛋白非酶糖基化位点的鉴定方法，其特征在于，通过UPLC-MS分析d-核糖诱导的非酶糖基化人肌红蛋白，确定相应的糖基化肽段，然后对糖基化肽段进行ESI-MS/MS分析，确定糖基化位点，最后用PEAKS Studio软件进行处理，再用PEAKSDB在uniport_homo sapiens数据库中进行搜索，验证糖基化位点。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述d-核糖诱导的非酶糖基化人肌红蛋白经胰蛋白酶酶切。

3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述胰蛋白酶与d-核糖诱导的非酶糖基化人肌红蛋白的质量比为40～20:0.5～1.5。

4.根据权利要求2或3任一项所述的鉴定方法，其特征在于，所述胰蛋白酶的酶切条件为36～38℃孵育13～20h。

5.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述糖基化肽段为T3、T8、T14和T21四个肽段。

6.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述UPLC-MS的色谱条件为：色谱柱为2.1×50mm C18反相柱；流动相A为质量浓度0.1％的HCOOH蒸馏水溶液，流动相B为质量浓度0.1％的HCOOH乙腈溶液；流速为0.2mL/min，按0～5min、流动相B：5％，5～45min、流动相B：5％→35％，45～50min、流动相B：35％→55％；50～55min、流动相B：55％，55～60min、流动相B：5％进行洗脱；流速为0.2mL/min；进样量为5μL。

7.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述UPLC-MS分析采用的碎片方式是碰撞诱导解离CID。

8.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述糖基化位点为K34、K56、K87、K147。

9.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述搜索参数为：片段离子质量容限为0.02Da、母离子容限为7ppm；

设置搜索固定修饰为氨基甲酰基化；

设置搜索可变修饰为氧化，Met，+15.99Da；脱酰胺化，NQ，+0.98Da；乙酰化，N-末端，+42.01Da；核糖化，Lys和Arg，+132.04Da；筛选-10lgP≥20的肽段和-10lgP≥20且含有至少1个唯一肽段的蛋白段。