[发明专利]用于检测艰难梭菌的试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种用于检测艰难梭菌的试剂盒，其包括微流控芯片、试纸条检测卡盒、复溶液和提取对照品，所述微流控芯片包括至少4个检测通道，所述检测通道内含有扩增引物和扩增试剂，所述试纸条检测卡盒包括微流控芯片卡槽、稀释液槽和至少4个试纸条槽。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增引物和扩增试剂为冻干粉；优选地，所述扩增试剂包含Taq DNA聚合酶和4种dNTP；更优选地，所述检测通道内还含有冻干保护剂。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测通道包括用于检测艰难梭菌毒素B基因的毒素B基因通道、用于检测艰难梭菌tpi基因的tpi基因通道、用于检测提取对照品基因的提取对照品基因通道和用于检测阴性对照的阴性对照通道。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增引物包含用于检测艰难梭菌毒素B基因的上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示；和/或用于检测艰难梭菌tpi基因的上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示；和/或用于检测提取对照品基因的上游引物和下游引物分别如SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示；优选地，所述上游引物和/或所述下游引物的5’端分别标记地高辛或荧光素。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试纸条槽里装有试纸条，所述试纸条包括顺次搭接在底衬上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，优选地，所述结合垫上包被乳胶颗粒或胶体金标记的的鼠抗地高辛抗体，所述硝酸纤维素膜上有包被荧光素抗体的检测线和包被羊抗鼠抗体的控制线；和/或所述稀释液槽含有PBS缓冲液。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述复溶液包括PCR扩增缓冲液。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述提取对照品包括人工构建的与艰难梭菌不同源的质粒菌冻干粉。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性质控品和/或阴性质控品，优选地，所述阳性质控品包括灭活的艰难梭菌菌株冻干粉，和/或所述阴性质控品包括无核酸酶的纯水。

9.一种采用权利要求1-8中任一项所述的试剂盒检测艰难梭菌的检测方法，包括如下步骤：

S1：提供待测样本的核酸模板；

S2：将所述核酸模板与所述复溶液混合后，加入到所述微流控芯片的检测通道中，密封；

S3：将密封后的微流控芯片进行PCR扩增，得到待测样品的扩增产物；

S4：将完成PCR扩增后的微流控芯片安装到所述试纸条检测卡盒的微流控芯片卡槽中，使所述稀释液槽中的稀释液与所述微流控芯片中的扩增产物混合后流到试纸条槽上，静置后，查看检测结果。

10.一种权利要求1-8中任一项所述的试剂盒或权利要求9所述的检测方法在艰难梭菌检测中的应用。