[发明专利]R环的高通量检测方法在审
| 申请号： | 202111076403.0 | 申请日： | 2021-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN113832221A | 公开（公告）日： | 2021-12-24 |
| 发明（设计）人： | 宋东亮;王嫚;侯策;江翱;陈晶晶;刘倩;卢瑶;曹振 | 申请（专利权）人： | 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 苏州根号专利代理事务所(普通合伙) 32276 | 代理人： | 朱华庆 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 通量 检测 方法 | ||
1.一种R环的高通量检测方法，其特征在于其步骤包括：
（1）提取样本中的DNA，使用ddNTP封闭样本中DNA的游离3’-OH；
（2）使用核糖核酸酶H及DNA聚合酶，将样本中RNA转化成带生物素修饰的DNA；
（3）DNA片段化和末端修复；
（4）接头连接；
（5）链霉亲和素磁珠富集带生物素修饰的DNA；
（6）链特异性文库扩增及测序。
2.根据权利要求1所述的R环的高通量检测方法，其特征在于：步骤（2）中采用大肠杆菌DNA聚合酶I以及核糖核酸酶H。
3.根据权利要求1所述的R环的高通量检测方法，其特征为：步骤（2）中对样本中的RNA扩增时使用生物素标记的dUTP。
4.根据权利要求3所述的R环的高通量检测方法，其特征为：所述生物素标记的dUTP为biotin-11-dUTP或biotin-16-dUTP。
5.根据权利要求4所述的R环的高通量检测方法，其特征为：步骤（2）的反应体系为：
组分 用量 经步骤（1）处理的样本DNA 20 ul 10 mM dA/G/CTP mix 0.2-1 ul 10 mM biotin-11-dUTP或biotin-16-dUTP 0.2-1 ul 10 U/ul E. coli DNA Polymerase I 0.5-2 ul 5 U/ul RNase H 0.1-2 ul 10× NEB Buffer™ 2 5 ul 10 mM ATP mix 1 ul 补DEPC水至 50 ul
。
6.根据权利要求5所述的R环的高通量检测方法，其特征为：步骤（2）的反应过程为16℃反应20-60 min。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于翌圣生物科技（上海）股份有限公司，未经翌圣生物科技（上海）股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202111076403.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
