[发明专利]一种基于植物介导的微生物复合菌系的筛选方法在审
申请号: | 202111034784.6 | 申请日: | 2021-09-04 |
公开(公告)号: | CN113667732A | 公开(公告)日: | 2021-11-19 |
发明(设计)人: | 丁延芹;杜秉海;汪城墙;刘凯;姚良同;李舒心 | 申请(专利权)人: | 山东农业大学 |
主分类号: | C12Q1/6869 | 分类号: | C12Q1/6869;C12Q1/04 |
代理公司: | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人: | 孙维傲 |
地址: | 271018 *** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 植物 微生物 复合 筛选 方法 | ||
1.一种基于植物介导的微生物复合菌系的筛选方法,其特征在于:包括:将等菌量菌液混合后定殖于植物根际,利用高通量测序技术对不同时期植物根际菌扩增子及宏基因组测序结果进行分析,筛选出优势菌。
2.如权利要求1所述的筛选方法,其特征在于:在菌液混合前,需要调试验菌株至单位菌量对应吸光度。
3.如权利要求1所述的筛选方法,其特征在于:对植物种子进行消毒及无菌催芽处理,形成植物幼苗,进行菌液定殖。
4.如权利要求1所述的筛选方法,其特征在于:具体步骤包括:
S1:采用LB培养基进行菌株培养;
S2:将每种菌液进行1:1等体积混合均匀,制备混合菌液;
S3:依次进行种子选取、消毒和催芽,得到无菌幼苗;
S4:将无菌幼苗放入混合菌液中进行菌液定殖,定殖后在1/2MS育苗培养基进行培育;
S5:将不同培育时期的育苗的根部剪下,在无菌水中震荡,提取植株根际菌;
S6:复合菌系的筛选:将所收集的植株根际菌进行高通量测序,并进行根际菌宏基因组测序分析,筛选出优势菌。
5.如权利要求4所述的筛选方法,其特征在于:所述步骤S3中,种子催芽在无菌1/2MS组培瓶中进行。
6.如权利要求4所述的筛选方法,其特征在于:所述步骤S4中,无菌幼苗的根用无菌水洗,洗去表面附着培养基后,再放入混合菌液中,使幼苗根部完全浸没于混合菌液中,进行菌液定殖。
7.如权利要求6所述的筛选方法,其特征在于:所述菌液定殖过程的时间为30-60min。
8.如权利要求4所述的筛选方法,其特征在于:所述步骤S4中,定殖后将幼苗移栽到无菌育苗培养瓶中,采用无菌镊子夹取幼苗茎部分,根系勿触碰瓶壁,垂直悬空放入,使幼苗直立于底部1/2MS育苗培养基上。
9.如权利要求4所述的筛选方法,其特征在于:所述步骤S4中,定殖后培育的条件为:光照条件:16h、25℃,光照强度60%;黑暗条件:8h、25℃、光照强度0%。
10.如权利要求4所述的筛选方法,其特征在于:将所收集的植株根际菌进行宏基因组测定,根据宏基因组结果将微生物菌种按照比例制备微生物复合菌系,即为基于植物介导的微生物复合菌系。
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