[发明专利]基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法

权利要求书

1.基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法，其特征在于，所述检测方法通过将待测分析样本与至少一种固体支持物相连，然后将靶标特异性结合组合物与待测分析样本中的靶标相连，该靶标特异性结合组合物包含有寡核苷酸，以该寡核苷酸为引物介导环状核酸分子的滚环复制得到球状滚环复制产物，通过对滚环复制产物的量化分析从而实现对分析物的定量检测。

2.根据权利要求1所述的基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法，其特征在于，所述待测分析样本包括细胞或细胞分泌物，所述细胞包括循环肿瘤细胞，所述细胞分泌物包括外泌体，所述固体支持物包括微球、微粒、成型的聚合物、薄膜、玻璃制品或金属制品或它们的组合。

3.根据权利要求1所述的基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法，其特征在于，所述靶标包括DNA、RNA、蛋白质、多肽或蛋白多糖。

4.根据权利要求1所述的基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法，其特征在于，所述靶标特异性结合组合物是非共价或共价偶联或连接到寡核苷酸的特异性结合分子，所述特异性结合分子是一种抗体、抗体片段，一种适体，一种寡核苷酸或一种小分子，并且具有靶标结合特异性。

5.根据权利要求1所述的基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法，其特征在于，所述靶标特异性结合组合物中的寡核苷酸每经过一次环状单链DNA分子长度的延伸之后，就会在其3’端增加一段与环状单链DNA分子互补的序列，最终经过多次扩增延伸，靶标特异性结合组合物中的寡核苷酸形成一条具有多段序列与所述环状单链DNA分子互补的长单链DNA扩增产物，该长单链DNA扩增产物能够自发卷曲形成几百纳米尺寸的DNA纳米球结构即为球状滚环复制产物。

6.根据权利要求5所述的基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法，其特征在于，所述滚环复制中使用具有DNA连接活性的酶和链置换活性的DNA聚合酶使特异性单链DNA分子连接成环并进一步使成环的单链DNA分子扩增延伸形成长单链DNA扩增产物，并形成DNA纳米球。

7.根据权利要求5所述的基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法，其特征在于，所述量化分析采用显微成像检测和流式细胞术分析实现。

8.根据权利要求7所述的基于固相捕获和滚环扩增放大靶标信号的定量检测方法，其特征在于，所述显微成像检测技术是落射荧光或共聚焦显微镜检术。