[发明专利]一种组织类器官的制备方法

权利要求书

1.一种组织类器官的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

步骤1、采用细胞外基质构建生物墨水；

步骤2、向步骤1获得的生物墨水中加入细胞悬液，获得含有细胞悬液的生物墨水；

步骤3、将步骤2获得的含有细胞悬液的生物墨水置于37℃恒温培养箱中预培养1-3天，获得预培养生物墨水；

步骤4、将预培养生物墨水转移至3D生物打印机进行打印，获得3D打印块；

步骤5、将3D打印块在室温下进行交联，再放置于培养箱中培养，即得组织类器官；

所述细胞外基质包含海藻酸钠、A型明胶、B型明胶、甲基丙烯酸化水凝胶、壳聚糖、透明质酸、胶原、琼脂糖以及合成性生物材料PLGA及其修饰物中的任意一种或多种。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1所述生物墨水包括浓度为1％-4％的海藻酸钠溶液和浓度为3％-5％的明胶溶液。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述生物墨水的制备方法如下：将海藻酸钠粉末使用去离子水配制成海藻酸钠溶液，将明胶粉末使用去离子水配制成明胶溶液，储存于4℃冰箱待用。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2所述细胞悬液由组织固有细胞或具有增殖分化作用的干细胞以及具有旁分泌、分泌囊泡和释放外泌体功能的干细胞制得。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述组织固有细胞包括成纤维细胞、上皮角质细胞、神经元细胞、神经胶质细胞、血管内皮细胞、软骨细胞、成骨细胞、肌肉细胞、小肠上皮细胞、肝细胞、肺上皮细胞中的任意一种；所述具有增殖分化作用的干细胞以及具有旁分泌、分泌囊泡和释放外泌体功能的干细胞包括胚胎干细胞、诱导多能干细胞、间充质干细胞、表皮干细胞、神经干细胞、肌肉干细胞、小肠隐窝细胞中的任意一种。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2所述细胞悬液中的细胞在生物墨水中的最终浓度为0.5*10⁶个细胞/mL-1*10⁷个细胞/mL；所述向步骤1获得的生物墨水中加入细胞悬液具体为：将生物墨水用37℃水浴中充分融化呈液态，融化时间≥1小时，再加入细胞悬液，并充分混匀。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4所述将预培养生物墨水转移至3D生物打印机进行打印具体包括以下步骤：将预培养生物墨水转移到3D生物打印机中，将打印筒放入4℃冰箱中静置，待预培养生物墨水转变为胶状时，用喷嘴进行打印获得3D打印块。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述3D生物打印机的打印参数设置为：平台温度为10℃，打印筒温度为15℃，打印速度为10mm/s，压力为70kPa-100kPa。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5包括以下步骤：

步骤5.1、将3D打印块用CaCl₂溶液在室温下交联，吸去残留的CaCl₂溶液，用完全培养基洗两次；

步骤5.2、加入完全培养基直至没过3D打印块，放入培养箱培养中培养，每2天换一次培养基，制得组织类器官。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述步骤5.2所述放入培养箱中培养，培养时间为3天。