[发明专利]蚕虫草活性成分的制备工艺及其用途

权利要求书

1.蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，该蚕虫草活性成分的制备工艺包括以下步骤：

(1)蚕虫草粗提液的制备：将蚕虫草真空冷冻干燥48h，用粉碎机粉碎后，过40目筛，制成蚕虫草冻干粉末，在-18℃，避光、密封储存备用；准确称取一定量蚕虫草冻干粉末，按照不同料液比，加入不同浸提溶剂，在不同提取温度和提取时间条件下进行恒温水浴搅拌提取，收集滤液，滤渣进行二次提取，合并滤液，减压浓缩，最终得到实验组蚕虫草粗提液；

(2)虫草素-腺苷混合标准溶液的制备：取等量虫草素和腺苷的标准储备液混匀，配成一定浓度的虫草素-腺苷混合标准溶液；

(3)蚕虫草中活性成分的分析：

a、HPLC法分析样品粗提液：a1：样品处理：取蚕虫草粗提液和腺苷-虫草素混合标准溶液各1mL，过0.22μm滤膜，注入液相进样瓶，待HPLC分析；a2：色谱条件：所用仪器：WatersAlliance e2695；C18-HCE分析型色谱柱(4.6×2.5mm，5μm，100A)；流速：0.6mL/min；检测：UV(260nm)；柱温：35℃±5℃；进样量：10μL；洗脱条件：0min～30min，甲醇0％～10％，超纯水(含0.5％CF3COOH)100％～90％，梯度洗脱；

b、制备液相分离纯化虫草素等活性成分：b1：一维制备：C18制备型色谱柱(50×250mm，10μm)；流速60mL/min；上样量50mL；洗脱条件：甲醇:超纯水＝15:85(V:V)，等度洗脱，根据谱图出峰情况，按照A、B、C、D号峰，分别收集各馏分，采用HPLC分析方法，对一维制备所得馏分A、B、C、D进行分析；其中，馏分A中含有多种组分；馏分B和馏分C分别为腺苷和虫草素；b2：二维制备：利用C18-HCE制备型色谱柱(50×230mm，10μm)；流速50mL/min；洗脱条件：0min～40min，甲醇0％～90％，超纯水100％～10％，梯度洗脱，对一维制备所得馏分A进行二维制备，于28min～32min范围内收集馏分E；采用HPLC分析方法，对二维制备所得馏分E进行分析得到化合物I和化合物Ⅱ。

2.根据权利要求1所述的蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，所述化合物I的结构式为：

所述化合物II的结构式为：

3.根据权利要求2所述的蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，所述化合物I和化合物Ⅱ分别命名为2-amino-N-((2S,3S,4R,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)tetrahydrofuran-3-yl)-6-ureidohexanamide和2-amino-N-((2S,3S,4R,5R)-5-(6-amino-9H-purin-9-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)tetrahy drofuran-3-yl)-6-guanidinohexanamide。

4.根据权利要求1所述的蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，所述料液比为：1:5(W/V)-1:50(W/V)之间。

5.根据权利要求1所述的蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，所述溶剂为水提液、1％醋酸提取液和30％乙醇提取液；优选为1％醋酸提取液。

6.根据权利要求1所述的蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，所述提取温度为30℃-90℃之间。

7.根据权利要求1所述的蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，所提取时间20-60min之间。

8.根据权利要求1所述的蚕虫草活性成分的制备工艺，其特征在于，所述蚕虫草活性成分用于抑制癌细胞的药物中的用途。