[发明专利]一种检测食品中羟基甲硝唑残留量的方法及产品

说明书

本发明公开了一种检测食品中羟基甲硝唑残留量的方法及产品。检测所用产品为式I所示羟基甲硝唑半抗原化合物。本发明依靠免疫学、免疫化学基本原理和残留分析技术手段，设计、合成小分子目标分析物半抗原，并与载体蛋白偶联，制备有效人工抗原，免疫动物制备针对小分子分析物的特异性抗体。利用抗原抗体的特异性免疫学反应，定性或定量检测食品样本中微量小分子目标分析物，具有特异、灵敏、准确、快速、方便、廉价等特点。

技术领域

本发明属于药物残留快速检测领域，涉及一种检测食品中羟基甲硝唑残留量的方法及产品。

背景技术

羟基甲硝唑为硝基咪唑类药物甲硝唑的代谢物，由于甲硝唑具有抗菌和抗原虫作用，能杀灭和预防厌氧菌和病原虫，因此在农业生产中常被用于预防和治疗家禽的滴虫病和球虫病、猪密螺旋体性痢疾及动物的各种厌氧菌感染。但甲硝唑具有潜在的致癌、致畸、诱变和遗传毒性作用，其残留对动物性食品构成了威胁。我国《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）中规定甲硝唑允许作治疗用兽药，但不得在动物性食品中检出。日本规定甲硝唑在食品中不得检出，欧盟和美国均规定了甲硝唑为禁用兽药。甲硝唑在体内吸收快，所以为保障动物源性食品安全，研究动物源食品中甲硝唑代谢物检测的方法具有重要意义。

目前羟基甲硝唑含量测定方法大多采用液相色谱法或液相色谱串联质谱法，过程繁琐，成本较高。免疫化学分析由于在抗原抗体的定性定量方面独特的优势和操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点弥补了理化分析的不足，但目前针对食品中羟基甲硝唑免疫检测方法研究较少，本发明对该检测方法进行了研究，免疫化学分析法在抗原抗体的定性定量方面具有独特的优势，其操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大，弥补了理化分析的不足，对于科学使用抗菌药、遏制细菌耐药性、公共健康安全及食品安全具有重大意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测食品中羟基甲硝唑残留量的方法及产品，具有灵敏度高、准确性强、灵敏度高、操作简便的优点。

本发明的一个目的是提供一种羟基甲硝唑半抗原化合物，其结构式如式I所示：

Chemical Formula：C₁₆H₁₇ClN₄O₆

Exact Mass：396.08

m/z：396.08(100.0％)，398.08(32.0％)，397.09(17.3％)，399.08(5.5％)，397.08(1.5％)，398.09(1.4％)，398.09(1.2％)

式I

本发明所提供的制备所述羟基甲硝唑半抗原的方法，具体可包括如下步骤：

羟基甲硝唑原料1g，用3ml甲醇钠溶解，加入对苯二甲醛缩二乙醛1.38g，搅拌，TLC检测反应完全时，加入盐酸淬灭反应，加入硅胶，进行柱层析拌样，旋干后进行柱层析，收集产物点，旋干得到中间体1，共725mg。

将725 mg中间体1用盐酸溶液溶解，搅拌，监测反应完全，调PH值到7，旋干溶剂进行柱层析，展开剂比例为二氯甲烷：甲醇=10：1，收集所需溶液，旋干，得到中间体2，共526mg。

称取526 mg中间体2，用乙醇溶解，加入羧甲基羟胺470 mg，搅拌，反应完全后，加入硅胶，进行柱层析，收集产物点，旋干溶剂，加入盐酸配置成羟基甲硝唑盐酸盐，得到488mg羟基甲硝唑半抗原。

在羟基甲硝唑半抗原的基础上构建所得的羟基甲硝唑抗原也属于本发明的保护范围。

所述羟基甲硝唑抗原，为将所述羟基甲硝唑半抗原（式I）与载体蛋白偶联所得的抗原。在本发明的一个实施例中，所述载体蛋白具体为牛血清白蛋白（BSA）或卵清蛋白（OVA）。

所述羟基甲硝唑抗原的制备方法也属于本发明的保护范围。