[发明专利]一种基于液相芯片检测蜱虫病原体核酸的方法及试剂盒

说明书

本发明公开的属于蜱虫检测技术领域，具体为一种基于液相芯片检测蜱虫病原体核酸的方法及试剂盒，其中基于液相芯片检测蜱媒病原体的方法包括以下步骤：S1：设计PCR引物、Tag探针序列和双结合探针序列，所述PCR引物用于扩增6种目的基因片段和1种内参基因，所述Tag探针为5’末端进行了AminolinkerC12修饰的针对6种目的基因和内参基因设计的用于标识荧光微球的探针。该基于液相芯片检测蜱虫病原体核酸的方法及试剂盒，采用液相芯片技术对六类常见的蜱媒病原体进行高通量多重检测，具有检测速度快、灵敏度高、病原覆盖度全等优势，可作为蜱虫检测和评估人类和动物感染的有利诊断工具。

技术领域

本发明涉及蜱虫检测技术领域，具体为一种基于液相芯片检测蜱虫病原体核酸的方法及试剂盒。

背景技术

蜱虫是仅次于蚊子的第二大传染病媒介生物，能够传播多种人兽共患病，危害性极大。蜱媒病原包括细菌、病毒、立克次体、螺旋体、寄生虫等，病原种类多样，但目前蜱媒病原的检测手段十分有限，缺乏相关的商品化检测试剂盒。在现行的一些非诊断性检测方法存在灵敏度低、操作复杂、结果判断存在一定的主观性等缺点，且几乎都是采取针对单个致病原的检测，覆盖度不足，容易造成漏检。

MASA液相芯片(Multi-Analyte Suspension Array，多功能悬浮点阵仪) 技术是20世纪90年代后期发展起来的一种高通量检测技术。该技术通过独有的微球荧光编码技术，可实现微球的高容量编码，每种微球具有不同的特征荧光谱，然后将每种编码微球共价交联上针对特定检测物的抗原/抗体或核酸探针等捕获分子。反应时，将各编码微球与待测物样本混合，反应悬液中的靶分子与微球表面交联的捕获分子发生特异性结合，在一个反应孔内可同时完成多达50种不同的检测靶标的检测反应。最后在配套仪器上通过两束激光分别识别微球编码和微球上报告分子的荧光强度，从而实现对检测指标的定性或定量分析。该技术多指标联检、兼容性强、高准确性、所需样本少等技术优势非常适合于病原体类的检测应用。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施方式的一些方面以及简要介绍一些较佳实施方式。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：

一种基于液相芯片检测蜱媒病原体的方法，其包括：

S1：设计PCR引物、Tag探针序列和双结合探针序列，所述PCR引物用于扩增6种目的基因片段和1种内参基因，所述Tag探针为5’末端进行了 Aminolinker C12修饰的针对6种目的基因和内参基因设计的用于标识荧光微球的探针，所述双结合探针序列用于与采用所述PCR引物扩增目的基因片段的扩增产物及Tag荧光微球进行特异性杂交；

在与所述探针互补的链的PCR引物的5’端进行生物素修饰，所述PCR引物包括7对引物，7对引物序列如下：

Anaplasma上游引物：AGTCCGGRAGAGGATAGCG；

Anaplasma下游引物：Biotin-TTCGCACCTCAGYGTCAG；

Borrelia上游引物：TAATGCTTRTTGGAGAAAATGAC；

Borrelia下游引物：Biotin-GCAACYTCAGCCATACCT；

Babesia上游引物：CAAGAACGAAAGTTAGGGGMT；

Babesia下游引物：Biotin-TGATTTCTCTCAAGSTSCTG；

Borreliella上游引物：CTTGTAGATGAGTCTGCGTCTTATTA；