[发明专利]一种高纯度小分子鱼皮胶原蛋白肽的制备方法以及鱼皮胶原蛋白肽喷雾剂

权利要求书

1.一种鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤(1)、鱼皮处理：用清水将鱼皮清洗干净，剪成小块，沥干；

步骤(2)、脱脂、脱色、除杂蛋白：将沥干的鱼皮和浓度为0.1M氢氧化钠溶液按照料液比1:10～1:20混合，加入质量分数为30％的双氧水，进行脱脂、脱色，每6小时更换一次溶液，更换3～6次；将鱼皮和质量分数为2％的氯化钠溶液按照料液比1:10～1:20混合除杂蛋白，每6小时更换一次溶液，更换3～6次；再将鱼皮和无水乙醇按照料液比1:10～1:20混合搅拌6小时，水洗至鱼皮无醇味，沥干；

步骤(3)、酶提取：按照料液比1:10～1:20将鱼皮加入浓度为1.0M的柠檬酸溶液，冰浴超声振荡，再加入鱼皮原料重量2％～4％的胃蛋白酶，在4～10℃下搅拌提取24～72小时，过滤除去鱼皮残渣，离心，得到上清液；

步骤(4)、调等电点沉淀胶原蛋白：用8M的氢氧化钠溶液调节上清液的pH为7，静置，待出现沉淀，离心，得到蛋白沉淀；

步骤(5)、双水相萃取法纯化蛋白：按照固液比1:10～1:20将蛋白沉淀加入(NH₄)₂SO₄和聚乙二醇6000的双水相萃取体系中，搅拌均匀，振荡反应1h～3h，静置，分相，取上相萃取液；

步骤(6)、透析、冷冻干燥：将萃取液透析3～4天，每隔6小时换一次透析液，冷冻干燥，得到无色鱼皮胶原蛋白粉末；

步骤(7)、酶解：用超纯水将鱼皮胶原蛋白粉末水溶液，调节pH为9～11，加入碱性蛋白酶酶解；

步骤(8)、分离、冷冻干燥：经过酶解的胶原蛋白肽溶液采用装填葡聚糖凝胶G-10的葡聚糖凝胶层析柱分离纯化，得到700Da的蛋白肽溶液，冷冻干燥，得到无色鱼皮胶原蛋白肽粉末。

2.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的双氧水和氢氧化钠溶液的体积比为1:100；

所述的脱脂、脱色在4～6℃下搅拌进行；脱脂、脱色后用水将鱼皮水洗至中性；

所述的除杂蛋白在4～6℃下搅拌进行；

所述的无水乙醇预冷至在4～6℃，在4～6℃下去残留的脂肪；用于洗涤的水预冷至4～6℃。

3.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，超声振荡的功率为100W，时间为15～20min；

所述的离心的转速为2900～3510r/min，离心的时间为15～20min；

步骤(4)中，所述的离心的转速为2900～3510r/min，离心的时间为15～20min。

4.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，所述的双水相萃取体系为质量分数为14％～16％的(NH₄)₂SO₄和质量分数为10％～14％的聚乙二醇6000的混合溶液。

5.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤(6)中，透析采用截留分子量为10000Da的透析袋；所述的透析液为超纯水或0.5M乙酸溶液；

所述的冷冻干燥的温度为-50℃～-20℃。

6.根据权利要求1所述的鱼皮胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于：步骤(7)中，用超纯水将鱼皮胶原蛋白粉末配成质量分数为2.5％的溶液；

加酶量为200000U/g，酶解温度为45～55℃，酶解时间为2～4小时。

7.一种鱼皮胶原蛋白肽喷雾剂，其特征在于：它是由包括以下重量份数的原料制成的：30～55份权利要求1制得的鱼皮胶原蛋白肽、0.05～30份透明质酸钠、0.02～10份尼泊金类防腐剂、0.02～5份抗氧化剂、0.02～15份非离子型表面活性剂、0.02～5份十二烷基甲基亚砜、0.02～15份甘油和250～350份水。