[发明专利]富含次生代谢物的植物组织中DNA的提取方法

权利要求书

1.一种富含次生代谢物的植物组织中DNA的提取方法，其特征在于，包括干扰物处理、组织细胞裂解、盐析、DNA沉淀和清洗步骤，其中，所述干扰物处理步骤包括：

将所述植物组织同交联聚乙烯吡咯烷酮一起研磨；以及

加入漂洗液对研磨后的所述植物组织进行干扰物漂洗处理；

其中，所述漂洗液包括：100～500mM Tris-Hcl pH＝4.8、0.35～0.5M山梨醇、5～10mMEDTA pH＝4.8、1～5％PVP和0.5～2％巯基乙醇。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述盐析包括：在所述组织细胞裂解后加入裂解液体积1/5-1/2的3M醋酸钾溶液pH＝4.8进行盐析处理。

3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述提取方法具体包括以下步骤：

S1，将所述植物组织在预冷的研磨管中利用研磨器研磨成粉末状，研磨前所述研磨管中加入有交联聚乙烯吡咯烷酮粉末；

S2，加入漂洗液对研磨后的所述植物组织进行干扰物漂洗处理，混匀离心弃上清液；

S3，向所述研磨管中加入2～5％CTAB裂解液，混匀，使所述植物组织悬浮，水浴，取出后，室温静置，离心取上清液；

S4，向所述S3中得到的上清液中加入3M醋酸钾溶液pH＝4.8，所述醋酸钾溶液的加入量是所述上清液体积的1/5～1/2，离心取上清；

S5，向所述S4中得到的上清中加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇抽提后取上清、然后加入等体积氯仿/异戊醇抽提后取上清；

S6，向所述S5中得到的上清中加入异丙醇进行DNA沉淀，弃上清；

S7，利用75％乙醇清洗所述DNA沉淀；

S8，所述DNA沉淀干燥后加入洗脱缓冲液溶解所述DNA沉淀，加入RNase A酶消化RNA。

4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述S2中的离心力为2500g～3000g，离心时间为10～15min，所述S2重复2次或2次以上。

5.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述S3中，所述CTAB裂解液为预热至65℃的CTAB裂解液，所述水浴的温度为65℃，水浴的时间为30～60min。

6.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述S4中，向所述S3中得到的上清中加入所述醋酸钾溶液后，于-20～-15℃放置10～20min，离心后取上清。

7.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述S5中，所述苯酚/氯仿/异戊醇中苯酚、氯仿与异戊醇的体积比为25:24:1；所述氯仿/异戊醇中氯仿与异戊醇的体积比为24:1。

8.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述S6中，所述异丙醇为预冷后的异丙醇，加入体积为上清液体积的0.8倍，然后在-20℃中放置30min，进行DNA沉淀。