[发明专利]一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法

权利要求书

1.一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于该方法具体是按以下步骤完成的：

一、玻璃基底表面疏水基团的修饰：

①、将疏水剂和甲苯混合均匀，得到疏水剂甲苯溶液；

步骤一①中所述的疏水剂为十八烷基三甲氧基硅烷或3-氨丙基三乙氧基硅烷；

步骤一①中所述的疏水剂与甲苯的体积比为1:100；

②、将清洗干净的基底浸入到疏水剂甲苯溶液中组装4h~8h，取出后使用甲苯冲洗，再氮气吹干，得到表面组装疏水基团的基底，放入4℃冰箱保存备用；

二、基底上磷脂膜的铺展：

①、将表面组装疏水基团的基底置于等离子清洗机中氧化处理，得到含有纳米级亲水和疏水结构的基底；

步骤二①中所述的氧化处理的工艺条件如下：压力为0.2MPa，功率为300W，氧化处理的时间为1s~30s；

②、首先将Tris缓冲液滴加到含有纳米级亲水和疏水结构的基底上，然后滴加磷脂囊泡溶液，磷脂囊泡下沉并与基底接触，破裂铺展在基底表面，最后使用Tris缓冲液冲洗掉剩余的磷脂囊泡，得到含有磷脂膜的基底；

③、将含有磷脂膜的基底在室温下继续孵育5min~120min，得到分离胆固醇后的磷脂膜。

2.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤一②中所述的基底为载玻片，基底的清洗过程如下：将基底在异丙醇中超声清洗10min~15min，再使用去离子水超声清洗10min~15min，最后使用氮气吹干，得到清洗干净的基底；所述的超声清洗的功率为250W~300W。

3.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二②中所述的Tris缓冲液的体积与基底的表面积比(0.5mL~5mL):(3cm²~5cm²)；步骤二②中所述的磷脂囊泡溶液的体积与基底的表面积比(0.5μL~30μL):(3cm²~5cm²)。

4.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二②中所述的Tris缓冲液中三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mmol/L，NaCl的浓度为150mmol/L，CaCl₂的浓度为2mmol/L。

5.根据权利要求1所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤二②中所述的磷脂囊泡溶液的制备方法具体是按以下步骤完成的：

（1）、将磷脂溶解到氯仿中，得到浓度为0.5mg/mL~20mg/mL的磷脂溶液；

（2）、将浓度为0.5mg/mL~20mg/mL的磷脂溶液均匀涂覆到洁净的ITO导电玻璃表面，再在温度为10℃~30℃下干燥2h~3h，得到表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃；

（3）、将两块表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃和玻璃框架组装成密闭的反应装置，向反应装置中注入反应介质溶液，再将表面覆盖有磷脂层的ITO导电玻璃的磷脂层与信号发生器相连接，在波形为正弦波、交流电压为1V~6V，频率为1Hz ~10⁴ Hz的条件下反应5min~120min，得到磷脂囊泡溶液。

6.根据权利要求5所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤（1）中所述的磷脂为1,2-二油酰磷脂酰胆碱、1,2-二棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和蛋黄卵磷脂中的一种或其中几种的混合物。

7.根据权利要求5所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤（3）中所述的反应介质溶液为蔗糖溶液、葡萄糖溶液或葡聚糖溶液；所述的反应介质溶液的浓度为10mmol/L~300mmol/L。

8.根据权利要求5所述的一种利用修饰基底分离磷脂膜中胆固醇的方法，其特征在于步骤（1）中所述的磷脂中胆固醇所占的摩尔百分比为 0.2~0.6。