[发明专利]一种S-氰醇裂解酶的制备方法及其产品有效
| 申请号： | 202110926742.7 | 申请日： | 2021-08-12 |
| 公开（公告）号： | CN113528498B | 公开（公告）日： | 2022-05-03 |
| 发明（设计）人： | 曹金辉;宗匡;喻海亮;曾鹏;刘建明;陈文欢 | 申请（专利权）人： | 江西科苑生物股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70 |
| 代理公司： | 南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 王晓东 |
| 地址： | 332700 *** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 裂解 制备 方法 及其 产品 | ||
1.一种S-氰醇裂解酶的制备方法，其特征在于：包括，
氰醇裂解酶野生型基因进行突变处理：将氰醇裂解酶基因，氰醇裂解酶的野生型基因序列如Seq ID No.1所示进行突变处理，处理后得到氰醇裂解酶突变子基因，氰醇裂解酶突变子基因序列如Seq ID No.2所示；
添加酶切位点：向氰醇裂解酶突变子基因两端插入双酶切位点；
制备重组质粒：将氰醇裂解酶突变子基因插入到表达载体中得到重组质粒；
导入菌株：将带有氰醇裂解酶基因的重组质粒导入到菌株中得到重组表达菌株；
菌株的分泌和表达：将重组表达菌株在培养液中诱导表达然后收集酶液。
2.如权利要求1所述S-氰醇裂解酶的制备方法，其特征在于：所述突变处理，其中，突变处理的方式为易错PCR。
3.如权利要求1所述S-氰醇裂解酶的制备方法，其特征在于：所述添加酶切位点中，双酶切位点为NdeI/HindIII。
4.如权利要求1所述S-氰醇裂解酶的制备方法，其特征在于：所述制备重组质粒中，表达载体为pET26b(+)。
5.如权利要求1所述S-氰醇裂解酶的制备方法，其特征在于：所述导入菌株中，所述菌株为E.coli BL21(DE3)。
6.如权利要求1所述S-氰醇裂解酶的制备方法，其特征在于：所述菌株的分泌和表达中，还包括诱导培养，当培养基中OD600=1.0后，加入0.2 mM IPTG并且保持温度为30℃，诱导表达4~5 h。
7.如权利要求1~6所述S-氰醇裂解酶的制备方法制得的产品，其特征在于：所述产品，其催化活性是野生型氰醇裂解酶的200%~500%倍。
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