[发明专利]紫地榆总鞣质对鼠急性胃溃疡保护作用的实验方法及应用

说明书

本发明公开了本发明紫地榆总鞣质对鼠急性胃溃疡保护作用的实验方法，包括如下步骤分组及造模、取材、溃疡指数评分、胃组织样本前处理、胃组织匀浆中总蛋白浓度定量、胃组织中总超氧化物岐化酶(T‑SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量测定、胃组织中前列腺素E2(PGE‑2)、血清中肿瘤坏死因子α(TNF‑α)含量测定、统计，本发明还提供了紫地榆总鞣质对鼠急性胃溃疡保护作用的实验方法的应用，应用于紫地榆总鞣质对胃溃疡保护作用实验；本发明属于紫地榆抗胃溃疡实验领域，具体是分别采用了阿司匹林和无水乙醇诱导小鼠急性胃溃疡模型，用来评价紫地榆总鞣质对胃溃疡的保护作用的紫地榆总鞣质对鼠急性胃溃疡保护作用的实验方法及应用。

技术领域

本发明属于紫地榆抗胃溃疡实验技术领域，具体是指紫地榆总鞣质对鼠急性胃溃疡保护作用的实验方法及应用。

背景技术

紫地榆在大理白族等地区常用于治疗肠炎、痢疾等疾病，其具有的老鹳草素成分已有相关报道证明其抗氧化和抗炎能力，鞣料云实素、五没食子酰葡萄糖等，并且也有报道表明其抗胃溃疡的能力，但目前并没有明确的科学实验及技术检测对其证明。因此本发明拟选择昆明种小鼠为受试对象，探讨紫地榆鞣质类成分对阿司匹林和无水乙醇诱导的小鼠急性胃溃疡的保护作用。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供分别采用了阿司匹林和无水乙醇诱导小鼠急性胃溃疡模型，用来评价紫地榆总鞣质对胃溃疡的保护作用，这两个模型代表了人类胃溃疡的一些常见病因，同时通过实验结果，模型为药剂药量的使用及发展建立了参考的紫地榆总鞣质对鼠急性胃溃疡保护作用的实验方法及应用。

本发明采取的技术方案如下：本发明紫地榆总鞣质对鼠急性胃溃疡保护作用的实验方法，包括如下步骤：

步骤一、分组及造模

选取小鼠并随机分组，分别设置正常组、模型组、阳性对照组、紫地榆提取物低剂量组、紫地榆提取物中剂量组、紫地榆提取物高剂量组，适应性喂养一周后，正常组和模型组灌胃生理盐水(10mL/kg)，阳性对照组灌胃2.0mg/mL的奥美拉唑悬浊液，紫地榆低剂量组灌胃总鞣质25mg/kg，中剂量组灌胃总鞣质50mg/kg，高剂量组灌胃总鞣质100mg/kg，每天给药1次，连续给药7天，在第7天给药完成1h后，按400mg/kg的剂量灌胃阿司匹林溶液，灌胃前禁食不禁水24h；

步骤二、取材

灌胃阿司匹林溶液后，各组小鼠继续禁食禁水饲养4h，4h后，摘掉小鼠眼球取血，所取的血液静置2h后，在4℃，4000r/min速度下离心10min，收集血清，-20℃冰箱保存，再断颈处死小鼠，打开腹腔，取出胃，沿胃大弯剪开，用生理盐水洗净胃残留物，滤纸吸干，待测；

步骤三、溃疡指数评分

将各组小鼠洗净后的胃自然展开铺于白色洁净滤纸上，胃内面朝上，观察溃疡情况，拍照，用游标卡尺测量出血带长度和宽度，并按表3.1所示计算溃疡指数；

表3.1溃疡指数评分标准

步骤四、胃组织样本前处理

准确称取一半胃组织重量，按重量(g):体积(mL)＝1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，匀浆，以3000转/分的速度，离心10min，取上清液，-20℃冰箱保存，待测；

步骤五、胃组织匀浆中总蛋白浓度定量

精密量取步骤四中所得组织匀浆10μL于0.5mL离心管中，加入生理盐水190μL，用漩涡混匀器充分混匀，得到稀释20倍后的组织匀浆溶液，待测，采用BCA微板法，根据蛋白定量试剂盒说明书操作步骤进行检测，记录吸光度值，按说明书上所列公式进行计算，蛋白定量(TP)生化试剂盒购自南京建成生物工程研究所；