[发明专利]一种改进的基于CRISPR技术检测靶核酸的方法

权利要求书

1.一种改进的基于CRISPR技术检测样品中靶核酸的方法，所述靶核酸为RNA，所述靶核酸具有5’至3’端依次连接的第一区段和第二区段，所述方法包括将样品与Cas12b、经改造的tracrRNA、DNA和单链核酸检测器接触；

所述DNA能够与所述靶核酸的第二区段杂交；

所述经改造的tracrRNA根据能够与Cas12b相互作用的野生型tracrRNA和crRNA所形成的复合结构进行改造，以使得所述经改造的tracrRNA的3’端可以和所述靶核酸的第一区段互补配对从而形成类似野生型tracrRNA和crRNA互补配对所形成的复合结构以指导Cas12b靶向所述DNA；

检测由所述Cas12b切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测所述靶核酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA为ssDNA或dsDNA。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述经改造的tracrRNA可以通过转录得到，也可以直接通过合成得到。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述可检测信号通过以下方式实现：基于视觉的检测，基于传感器的检测，颜色检测，基于试纸条的检测，基于金纳米颗粒的检测，荧光偏振，荧光信号，胶体相变/分散，电化学检测，或者，基于半导体的检测。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品为来源于病毒、细菌、微生物、土壤、水源、人体、非人动物或植物的样品。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸来源于病毒、细菌、微生物、土壤、水源、人体、非人动物或植物等样品。优选的，所述靶核酸为病毒核酸、细菌核酸、与疾病相关的特异核酸。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶核酸选自样品中天然存在的RNA，以及对样品的DNA进行转录得到的RNA。

8.一种用于检测样品中靶核酸的系统或组合物或试剂盒，所述靶核酸为RNA，所述靶核酸具有5’至3’端依次连接的第一区段和第二区段，所述系统或组合物或试剂盒包括权利要求1-7任一权利要求中所述的Cas12b、经改造的tracrRNA、DNA和单链核酸检测器。

9.权利要求8所述的系统或组合物或试剂盒在检测样品中靶核酸的应用，所述靶核酸为RNA。

10.权利要求8所述的系统或组合物在制备检测样品中靶核酸的试剂或试剂盒中的应用，所述靶核酸为RNA。

11.一种改进的检测样品中靶核酸的方法，所述靶核酸具有5’至3’端依次连接的第一区段和第二区段，所述靶核酸为RNA，所述方法包括将样品与Cas12b、经改造的tracrRNA和DNA接触；

所述DNA能够与所述靶核酸的第二区段杂交；

所述经改造的tracrRNA是根据能够与Cas12b相互作用的野生型tracrRNA和crRNA所形成的复合结构进行改造，以使得所述经改造的tracrRNA的3’端如此设置以和所述靶核酸的第一区段互补配对从而形成类似野生型tracrRNA和crRNA互补配对所形成的复合结构从而指导Cas12b靶向所述DNA；

所述经改造的tracrRNA的末端添加第一标记分子，所述DNA的末端添加第二标记分子；

在不存在所述靶核酸的情况下，所述第一标记分子和第二标记分子呈现第一状态；在存在所述靶核酸的情况下，所述第一标记分子和第二标记分子呈现第二状态；

所述第一状态和第二状态表现出可检测信号，根据可检测的信号从而检测所述靶核酸。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述可检测信号可通过以下方式检测：基于视觉的检测，基于传感器的检测，颜色检测，基于试纸条的检测，基于金纳米颗粒的检测，荧光偏振，荧光信号，胶体相变/分散，电化学检测和基于半导体的检测。