[发明专利]PCR预混液及其在检测粪便样本中核酸的应用

说明书

本发明提供了PCR预混液及其在检测粪便样本中核酸的应用，具体地，本发明公开了在基本PCR反应体系里面添加3‑(N‑吗啉基)丙磺酸、(NH₄)₂SO₄、DMSO和氧化型谷胱甘肽，可以降低粪便中的多糖抑制物对DNA聚合酶的抑制，同时也可以消除其它杂菌对PCR扩增的干扰，因此极大的提高了从粪便样本中检测出低含量核酸的成功率。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体地，涉及一种PCR预混液及其在检测粪便样本中核酸的应用。

背景技术

粪便是来自动物消化道的食物渣滓，在临床上通常采集粪便样本来检测寄生虫或病原性微生物。近年来，随着精准医疗的开展，粪便样本的诊断价值逐步上升。目前比较常见的是使用粪便样本检测胃肠道微生物的情况。随着时间发展，胃肠道微生物群体会受到多种影响，例如：个体基因差异、年龄、性别、营养、抗生素或其它药物、身体状况、生活方式等。

通常采用核酸检测的方式对粪便样本中的核酸进行检测。由于粪便中的核酸来源复杂种类繁多，特别是粪便中含有大量的消化残留物和微生物，导致核酸非常容易分解，因此粪便中的有效核酸含量极少。极大的增加了粪便样本中核酸的检测难度。

幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori，H.pylori)生存于人体胃部，是最常见的细菌病原体之一，世界有多半人口受到过幽门螺杆菌的感染。自从幽门螺杆菌(Hp)发现20多年来，与Hp密切相关的胃肠道疾病包括：活动性胃炎、消化性溃疡病、胃癌、胃粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤等。目前估计全球约有50％的人感染Hp。1994年，世界卫生组织已经将Hp列为第I类致癌因子。

目前对幽门螺杆菌诊断较为准确的方法有13C/14C呼气试验和胃粘膜组织活检。但C13/14呼气试验具有放射性，对人体有害；而胃粘膜组织活检不易取材。有研究报道幽门螺杆菌可随粪便少量的排出体外，实验人员通常希望从粪便中检测幽门螺杆菌，从而达到诊断目的，但粪便中幽门螺杆菌含量极低，同时粪便中存在大量抑制物且其他的杂菌含量很高，因此在做PCR检测的时候很难将幽门螺杆菌检测到。

因此，本领域迫切需要开发一种能够在有效检测粪便样本中低含量核酸的技术，以满足临床的检测需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种PCR预混液及其在检测粪便样本中核酸的应用。

本发明的第一方面，提供了一种PCR预混液，所述PCR预混液含有3-(N-吗啉基)丙磺酸。

在另一优选例中，所述PCR预混液还含有氧化型谷胱甘肽。

在另一优选例中，所述PCR预混液还含有(NH₄)₂SO₄。

在另一优选例中，所述PCR预混液还含有DMSO。

在另一优选例中，所述PCR预混液包含选自下组的一个或多个组分：3-(N-吗啉基)丙磺酸、(NH₄)₂SO₄、DMSO和氧化型谷胱甘肽。

在另一优选例中，所述PCR预混液包含：3-(N-吗啉基)丙磺酸、(NH₄)₂SO₄、DMSO和氧化型谷胱甘肽。

在另一优选例中，所述PCR预混液还含有选自下组的一种或多种组分：

Tris-HCl、KCl、和MgCl₂。

在另一优选例中，使用所述PCR预混液进行PCR扩增时，PCR扩增体系中3-(N-吗啉基)丙磺酸的终浓度为5mM-15mM，优选为10mM。