[发明专利]一种用于同步检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于同步检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的试剂盒。试剂盒为多重荧光定量PCR试剂盒，包括用于扩增非洲猪瘟病毒CD2v基因、非洲猪瘟病毒P72基因和猪伪狂犬病毒EP0基因的引物对以及对应的荧光探针，用于扩增CD2v基因的引物对及其对应的荧光探针、用于扩增P72基因的引物对及其对应的荧光探针、用于扩增EP0的引物对及其对应的荧光探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1～9所示。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种用于同步检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的试剂盒。

背景技术

近些年，在养猪生产中多种病原混合感染已成普遍现象。猪群发病，常常不是单一病原引起的，而是由两种或者多种病原共同作用造成的，延误了诊断和防治，导致猪群高发病率和高死亡率，造成极大的经济损失。在存在多病原混合感染的猪场，猪病临床症状复杂，病例变化不典型，病情严重，现场难以确诊，一般防治措施也难以奏效。对各病毒的检测可采用传统的诊断方法，比如病毒分离检测法或血清学检测方法。病毒分离检测方法存在操作方法繁琐，诊断时间长以及由于采样样本污染造成的结果不确定等问题，血清学诊断方法因病毒的变异株不断出现，导致该方法在实际应用中受到诸多限制，此外，这两种方法都存在检测灵敏度低的缺点。

目前市场上核酸检测试剂盒以荧光定量PCR检测试剂盒为主，此类试剂盒一般采用的方法都是Taqman探针法，这也跟我们国内公布的各类病原的核酸检测标准所要求的方法一致。Taqman探针法是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的，与普通PCR相比，荧光定量PCR具有许多优点。它融汇PCR技术的核酸高效扩增、探针技术的高特异性、光谱技术个高敏感性和高精确定量的优点，直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。与传统PCR技术相比，它具有操作简便、快速、高效的优点。其次，它是在完全封闭的体系中完成扩增，实现实时监测，消除交叉污染。第三，无需凝胶电泳，只需通过特殊探头在反应管内直接检测。第四，定量结果准确，重现性好。因此，该项技术受到许多科研工作者的重视，并在很多领域得以应用。

商品化的PCR试剂盒多为单项PCR，1个试剂盒1次试验仅能检测1种病原，对于混合感染2种及以上的病原的同份猪病病料要确诊其病原就要2种及以上试剂盒并进行2次及以上的PCR试验，不仅费时费力，检测成本也较高。因此，开发一种可以同步检测2种及以上的病原且敏感性高的方法就非常有应用价值。

发明内容

本发明为解决上述技术问题提供了一种用于同步检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的试剂盒，以简单、快速、高效的检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种用于同步检测非洲猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的试剂盒，所述试剂盒为多重荧光定量PCR试剂盒，包括用于分别扩增非洲猪瘟病毒CD2v基因、非洲猪瘟病毒P72基因和猪伪狂犬病毒EP0基因的引物对以及对应的荧光探针，所述用于扩增CD2v基因的引物对为ASFV-CD2v-F和ASFV-CD2v-R，其对应的荧光探针为ASFV-CD2v-P，所述用于扩增P72基因的引物对为ASFV-P72-F和ASFV-P72-R，其对应的荧光探针为ASFV-P72-P，所述用于扩增EP0的引物对为PRV-EP0-F和PRV-EP0-R，其对应的荧光探针为PRV-EP0-P，所述ASFV-CD2v-F、ASFV-CD2v-R、ASFV-CD2v-P、ASFV-P72-F、ASFV-P72-R、ASFV-P72-P、PRV-EP0-F、PRV-EP0-R和PRV-EP0-P的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。