[发明专利]一种甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复基因Rfo

说明书

本发明公开了一种甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复基因Rfo的SNP分子标记及其应用，所述SNP分子标记为BN900009.K02，其中BN900009.K02的多态性为A或G，所述SNP分子标记位于甘蓝型油菜基因组BrassicanapusV4.1版本的A9号染色体的第5748820bp处。本发明方案利用所述分子标记，可以快速准确的检测甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复基因Rfo，利用分子标记辅助选择育种，简单有效，可以降低育种成本，缩短选育周期，亦可进行有目的的多基因聚合，提高育种效率，带来巨大的社会经济效益。

技术领域

本发明属于农业分子生物学领域，具体涉及一种甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复基因Rfo的SNP分子标记及其应用。

背景技术

油菜是继大豆和油棕之后的第三大油料作物，也是主要食用油之一。杂种优势是自然界普遍存在的一种生物现象，表现为两个亲本间杂交子代的某些性状优于双亲，因此在油菜育种工作中被广泛应用。雄性不育系制种是甘蓝型油菜杂交种生产的主要途径。

Ougra CMS（萝卜细胞质不育）最早是由在萝卜(Raphanus sativus)中发现的，有学者将欧洲甘蓝型油菜与Ougra CMS不育系杂交，并连续回交转育成甘蓝型油菜胞质不育系，其不育性十分稳定，是由细胞质中线粒体嵌合基因orf138和一对隐性细胞核基因(rf/rf)共同控制。而Ougra CMS的恢复基因仅存在于萝卜中，相关技术通过种属间杂交及分子标记辅助选择等技术，将Ougra CMS的恢复系的恢复基因Rfo从萝卜导入到油菜中，相关技术运用图位克隆的手段成功克隆出了恢复基因，并对携带有Rfo恢复基因的外源DNA片段定位，推动了Ogu-Rf体系广泛地用于杂交油菜育种。

相关技术公布的分子标记大多为SSR和CAPS标记，需要进行凝胶电泳检测，检测过程使用的核酸染料等试剂对环境及人体有危害，且自动化程度低检测通量小，另外有时会出现非特异扩增的情况，导致检测结果无法准备判断，很大程度上限制了检测效率。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复基因Rfo的SNP分子标记。

本发明还提出用于检测上述SNP分子标记的引物组。

本发明还提出上述SNP分子标记的检测方法。

本发明还提出上述SNP分子标记的应用。

根据本发明的第一方面实施方式的SNP分子标记，所述SNP分子标记为BN900009.K02，其中BN900009.K02的多态性为A或G，所述SNP分子标记位于甘蓝型油菜基因组Brassica napus V4.1版本的A9号染色体的第5748820bp处。

根据本发明第二方面实施方式的用于检测上述SNP分子标记的引物组，所述引物组包括特异型性引物；所述特异性引物包括Primer Seq Allele X和Primer Seq AlleleY，所述Primer Seq Allele X的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Primer Seq AlleleY的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本发明的一些实施方式中，所述Primer Seq Allele X的5’端连接FAM或HEX荧光序列，Primer Seq Allele Y的5’端分别连接FAM或HEX荧光序列。

在本发明的一些实施方式中，所述引物组在油菜基因型检测中的应用。

根据本发明的第三方面实施方式的一种甘蓝型油菜萝卜细胞质不育恢复基因Rfo基因型的检测方法，所述方法包括如下步骤：