[发明专利]一种睾酮的磁颗粒酶促化学发光免疫检测试剂

权利要求书

1.一种睾酮的磁颗粒酶促化学发光免疫检测试剂，其特征在于：其组成成分：0.01-0.05％的包被有睾酮抗原的超顺磁性微粒、碱性磷酸酶标记睾酮抗体、睾酮释放试剂、碱性磷酸酶发光底物以及磁珠清洗液；

所述睾酮释放试剂为双氢睾酮、达那唑、肝素钠、8-苯胺-1-萘磺酸(ANS)、8-苯胺-1-萘磺酸盐、三氯乙酸钠、2-HydroxymethyleneEthisterone(CAS:2787-02-2)、炔孕酮(ethisterone，CAS:434-03-7)、2-Hydroxymethyl-1,2-dehydroethisterone(CAS:60142-08-7)中的一种或多种组合。

2.根据权利要求1所述的一种睾酮的磁颗粒酶促化学发光免疫检测试剂，其特征在于：所述睾酮释放试剂中各个组分的浓度为：双氢睾酮的浓度为0.01-0.05mg/mL、达那唑的浓度为0.05-0.5mg/mL、肝素钠的浓度为2-50mg/mL、8-苯胺-1-萘磺酸(ANS)或8-苯胺-1-萘磺酸盐浓度为1-5mg/mL、三氯乙酸钠的浓度为1-25mg/mL，炔孕酮的浓度为0.05-0.25mg/mL、2-HydroxymethyleneEthisterone(CAS:2787-02-2)的浓度为0.01-0.5mg/mL、2-Hydroxymethyl-1,2-dehydroethisterone的浓度为0.01-0.60mg/mL；

所述睾酮释放试剂的配制方法为，

S1：按照组分配比取具有释放睾酮作用的化合物，用DMSO或DMF或纯水溶解，制得浓度为500mg/mL的母液，

S2：通过缓冲液稀释至对应浓度，制得睾酮释放试剂。

3.根据权利要求2所述的一种睾酮的磁颗粒酶促化学发光免疫检测试剂，其特征在于：所述S2中，缓冲液为PBS缓冲液，码啉乙磺酸缓冲液(MES)，Tris-HCL缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸(MOPSO)缓冲液，甘氨酸-盐酸缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、TRIS缓冲液中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种睾酮的磁颗粒酶促化学发光免疫检测试剂，其特征在于：所述包被有睾酮抗原的超顺磁性微粒的制备方法为，

A1：取1mL的商品化的羧基磁珠(10mg/mL)至2.0mL的离心管中，将离心管置于磁分离器上进行磁分离，吸去上清；

A2：往离心管中加入1mL的标记缓冲液(0.1M MES，pH5.0)，重悬磁珠，再置于磁分离器上进行磁分离，吸去上清；

A3：往离心管中加入1mL的标记缓冲液，并振荡混匀，从而重悬磁珠；

A4：再往重悬后的磁珠中加入100ul的睾酮抗原(睾酮-BSA耦合物)，室温旋转混合30min；

A5：往磁珠及睾酮抗原的混合物中加入100ul的偶联剂EDC(10mg/mL,标记缓冲液配制)，振荡混匀，室温旋转混合3h；

A6：反应完成后，将离心管置于磁分离器上进行磁分离，去上清后，加入1ml的磁珠清洗缓冲液(25mM Tris-HCL,150mM NaCl,0.05％吐温20，pH7.2)，振荡混匀后，再置于磁分离器上进行磁分离，再去上清。磁珠清洗重复3次；

A7：最后一步清洗完成，加入500ul磁珠保存缓冲液(50mM Tris,150mM NaCl,1％BSA,0.05％PC300,pH7.2)，重悬磁珠后冷藏保存。