[发明专利]一种提高乳酰-N-四糖产量的基因工程菌及其生产方法

权利要求书

1.一种产乳酰-N-四糖的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌敲除了β-半乳糖苷酶基因lacZ，并过表达β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因lgtA、β-1,3-半乳糖基转移酶基因wbgO、UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因galE、半乳糖-1-磷酸尿苷转移酶基因galT和半乳糖激酶基因galK；所述基因工程菌利用pCDFDuet-1表达lgtA和wbgO，利用pETDuet-1表达galE、galT和galK；

所述lgtA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述wbgO的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述galE的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，所述galT的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述galK的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主。

3.权利要求1或2所述的基因工程菌在生产乳酰-N-四糖中的应用。

4.一种生产乳酰-N-四糖的方法，其特征在于，以乳糖和甘油为碳源，利用权利要求1或2所述的基因工程菌发酵生产乳酰-N-四糖。

5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，培养至OD₆₀₀为10~13，加入终浓度为15~25g/L乳糖、0~20 g/L半乳糖和0.2~1.0 mM的IPTG。

6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，发酵条件为，培养温度为24~38℃，搅拌转速250~850 r/min，通气量0.8~1.2 vvm，pH 6.5~7.0。