[发明专利]一种人β-类胰蛋白酶mRNA RT-PCR检测用引物探针组和试剂盒

说明书

本发明涉及一种人β‑类胰蛋白酶mRNART‑PCR检测用引物探针组和试剂盒，属于生物检测技术领域。本发明所述引物探针组包括引物TPSB‑F、引物TPSB‑R和探针T‑Probe，所述引物TPSB‑F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物TPSB‑R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针T‑Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明针对人TPSB建立的TaqMan实时荧光定量一步法RT‑PCR检测引物探针组，为该蛋白的检出提供准确度高、检测范围广及灵敏度高的检测手段。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种人β-类胰蛋白酶mRNA RT-PCR检测用引物探针组和试剂盒。

背景技术

肥大细胞在过敏反应中被激活，释放包括类胰蛋白酶在内的炎症介质，这一过程导致过敏反应的症状和体征。类胰蛋白酶具有促进气道的修复、调节气道平滑肌细胞的张力和反应性、刺激肥大细胞的活化等作用。目前，类胰蛋白酶在cDNA和蛋白水平被分为三类：α、β、γ，其中β含量最高。发生过敏反应后，血液循环中β-类胰蛋白酶(TPSB)水平的短暂升高有助于识别和评估过敏反应的程度，测定β-类胰蛋白酶水平短暂升高的样品应在发生过敏反应后15分钟至3小时采集。血液中短暂的β-类胰蛋白酶水平升高提示药物、昆虫毒液或食物引起过敏反应，长期持续的β-类胰蛋白酶水平升高则提示肥大细胞增生症或血液肿瘤。鼻腔分泌物中β-类胰蛋白酶水平(或浓度)升高提示活动性过敏性鼻炎或是过敏性鼻炎患者正在变应原激发试验。

现在市场上对于TPSB的检测仍使用酶联免疫吸附法(enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA)试剂盒检测其在体液中的含量，尚未见检测TPSB mRNA的商业化试剂盒。ELISA方法在检测过程中存在着检测范围小和灵敏度低的问题，且其准确性也存在问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人β-类胰蛋白酶mRNART-PCR检测用引物探针组和试剂盒。本发明针对人TPSB建立的TaqMan实时荧光定量一步法RT-PCR检测引物探针组，为该蛋白的检出提供准确度高、检测范围广及灵敏度高的检测手段。

本发明提供了一种人β-类胰蛋白酶mRNART-PCR检测用引物探针组，所述引物探针组包括引物TPSB-F、引物TPSB-R和探针T-Probe，所述引物TPSB-F的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述引物TPSB-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述探针T-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

优选的是，所述探针T-Probe的5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。

优选的是，还包括内参基因的引物GAPDH-F、引物GAPDH-R和探针G-Probe，所述引物GAPDH-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述引物GAPDH-R的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，所述探针G-Probe的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

优选的是，所述探针G-Probe的5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团；探针G-Probe标记的荧光报告基团与探针T-Probe标记的荧光报告基团不同。

优选的是，所述荧光报告基团包括FAM或JOE，所述淬灭基团包括BHQ1。

本发明还提供了一种人β-类胰蛋白酶mRNART-PCR检测用试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述引物探针组、PCR反应液、酶混合液、β-类胰蛋白酶标准品、ROX参比染料和无核酶水。

优选的是，所述PCR反应液包括dNTPmix、MgCl₂和缓冲液。

优选的是，所述酶混合液包括Taq酶、逆转录酶、RNA酶抑制剂和Taq酶抗体。