[发明专利]一种模拟荧光基团扩增反应的方法

说明书

本发明提供了一种模拟荧光基团扩增反应的方法，使用本方法所述标准装置对实时荧光定量PCR仪进行检测和校准，所述标准装置包括检测端和电路板，所述检测端包括标准光源；开启实时荧光定量PCR仪和标准装置，设置所对应的qPCR程序和校准测试程序，标准装置放入实时荧光定量PCR仪中；运行所述qPCR程序，检测端采集到实时荧光定量PCR仪的加热模块的温度数据；所述标准装置根据校准测试程序采集到的温度数据和预设的发光比例，控制发光亮度，从而模拟荧光基团扩增反应的亮度变化；所述标准装置的光亮变化被实时荧光定量PCR仪所检测，生成模拟荧光基团扩增反应的检测数据，最后根据所述检测数据分析实时荧光定量PCR仪的性能。

技术领域

本发明涉及实时荧光定量PCR仪检测技术领域，尤其涉及一种模拟荧光基团扩增反应的方法，并采用了分子诊断检测的配套标准装置。本发明还特别涉及一种体外诊断检测仪器，尤其涉及实时荧光定量PCR仪的配套校准装置，还属于分子诊断检测仪器中的分子生物信息分析处理系统，同时涉及体外诊断检测仪器中的各类体外诊断用试剂、试纸及其配套设备与耗材。

背景技术

实时荧光定量PCR仪是用来监测循环过程的荧光，与实时设备相连的计算机收集荧光数据，数据通过开发的实时自动分析软件以标准曲线的形式显示。实时荧光定量PCR仪主要是采用外标准曲线法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析。目前实时荧光定量PCR仪在基因表达研究、转基因研究、基因的多态性研究、药物疗效考核、病原体检测等诸多领域广泛应用。

实时荧光定量PCR仪的温场模块和光学系统需要通过监测来实现对基因扩增反应前仪器参数的校准和反应过程中的实时监控。

目前，可以实现对实时荧光定量PCR仪的温场部分的物理监测，但是，针对实时荧光定量PCR仪的光路系统，则主要还是通过生物化学方法，缺乏完善的物理方法。常用的生物化学方法有：采用厂家提供的生物试剂测试盘或质粒DNA标准物质、核糖核酸标准物质等对其荧光强度精密度、样本精密度、荧光线性相关性和样本线性相关性进行检测。这种生物化学方法具有以下几个共性问题：(1)采用这种方式的检测实质上是对仪器本身检测结果的一种对照及判断，不可追溯过程及相关参数，无法判断结果的偏差是由温控系统还是光路系统导致的。无法说明实时荧光定量PCR仪的温度和荧光对最终定量结果的影响关系，误差多少及误差来源等。(2)仅能够针对孔与孔间的组合线性进行测量，所得结果仅能代表荧光定量PCR仪孔与孔间的平均结果，不能代表单孔的线性。(3)不具备直接参数的溯源性。(4)所采用的试剂及标准物质均属于消耗品，只能单次使用，长期使用成本高；同时，试剂及标准物质一般需要存放在-80℃环境下才能保持其特性不发生改变，一旦取出后必须使用，不能反复冻融。

对于模块加热的聚合酶链反应(PCR)分析仪计量性能的校准，已有JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》和医药行业规范YY/T《1173-2010聚合酶链反应分析仪》(以下均简称规范)做出了明确规定，实时荧光定量PCR仪属于一种定量PCR仪，可以参照规范执行。对于光路系统的检测，规范明确记载了采用质粒DNA标准物质或荧光染料标准物质进行梯度稀释来进行样本线性及荧光线性的检测。规范中要求样本线性是以系列稀释的标准物质(至少5个)扩增Ct值与浓度对数值进行线性回归，计算其线性回归系数。目前的标准品一般稀释包括S1-S77个梯度浓度的标准物质，也可以是5个或6个，每个梯度浓度有多个重复孔(比如6个孔)，然后以这6个重复孔的平均Ct值作为这一浓度的Ct值结果。NTC是阴性对照，即没有初始DNA，整个过程荧光发光信号理论值为0或很低的发光亮度，重点是也不会发生变化。当使用标准物质进行浓度稀释的过程中，人为操作肯定会引入一定的误差，误差值有可能会比较大，直接影响到最终的检测结果。

发明内容

本公开的目的在于至少部分地克服现有技术的缺陷，提供一种模拟荧光基团扩增反应的方法，用于对实时荧光定量PCR仪进行检测和校准。

本公开的目的还在于提供一种模拟荧光基团扩增反应的方法，用于对实时荧光定量PCR仪的光路系统和温场同时进行物理方法的检测和校准。