[发明专利]一种可以在毕赤酵母高效分泌的单加氧酶突变体及应用有效
| 申请号： | 202110879522.3 | 申请日： | 2021-08-02 |
| 公开（公告）号： | CN113583985B | 公开（公告）日： | 2023-08-01 |
| 发明（设计）人： | 郁惠蕾;李亚静;郑宇璁;许建和;潘江;秦鹏 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/81;C12N1/19;C12P17/16;C12R1/84 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明伟 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 可以 酵母 高效 分泌 单加氧酶 突变体 应用 | ||
1.一种单加氧酶突变体，其特征在于，所述单加氧酶突变体是由下述任一氨基酸序列对应的蛋白质：
(1) 将如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的第3位谷氨酰胺替换为苏氨酸；
(2) 将如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的第3位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第111位谷氨酰胺替换为苏氨酸；
(3) 将如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的第3位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第43位丙氨酸替换为甘氨酸，第111位谷氨酰胺替换为苏氨酸；
(4) 将如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的第3位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第14位甘氨酸替换为丙氨酸，第71位亮氨酸替换为甲硫氨酸；
(5) 将如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的第3位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第14位甘氨酸替换为丙氨酸，第43位丙氨酸替换为甘氨酸，第71位亮氨酸替换为甲硫氨酸；
(6) 将如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的第3位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第14位甘氨酸替换为丙氨酸，第43位丙氨酸替换为甘氨酸，第71位亮氨酸替换为甲硫氨酸，第111位谷氨酰胺替换为苏氨酸；
(7) 将如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的第3位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第14位甘氨酸替换为丙氨酸，第43位丙氨酸替换为甘氨酸，第71位亮氨酸替换为甲硫氨酸，第111位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第120位丙氨酸变成苏氨酸；
(8) 将如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的第3位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第14位甘氨酸替换为丙氨酸，第43位丙氨酸替换为甘氨酸，第55位亮氨酸替换酪氨酸，第71位亮氨酸替换为甲硫氨酸，第111位谷氨酰胺替换为苏氨酸，第120位丙氨酸替换成苏氨酸。
2.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸是编码如权利要求1所述单加氧酶突变体的核酸。
3.一种重组表达载体，其特征在于，包含如权利要求2所述核酸。
4.一种重组表达转化体，其特征在于，包含如权利要求3所述重组表达载体。
5.一种催化剂在催化大位阻潜手性拉唑硫醚氧化反应制备光学纯亚砜中的应用，其特征在于，所述催化剂为权利要求1所述单加氧酶突变体、权利要求4所述重组表达转化体的培养物或重组表达转化体的分泌上清；
所述大位阻潜手性拉唑硫醚的化学式如式1所示：
。
6.根据权利要求5所述的一种催化剂在催化大位阻潜手性拉唑硫醚氧化反应制备光学纯亚砜中的应用，其特征在于，所述催化剂催化大位阻潜手性拉唑硫醚氧化反应，反应过程中消耗还原型辅酶NADPH，生成氧化型辅酶NADP+。
7.根据权利要求6所述的一种催化剂在催化大位阻潜手性拉唑硫醚氧化反应制备光学纯亚砜中的应用，其特征在于，所述反应体系中含有辅酶NADP+或NADPH，额外添加甲酸脱氢酶，催化甲酸盐氧化，再生还原型辅酶NADPH。
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