[发明专利]一种产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明提供了一种产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌及其应用，本发明的枯草芽孢杆菌斯氏亚种SLLSM1菌株从从广西来宾甘蔗地的土壤中分离而得，其保藏编号为CCTCC NO：2021697，保藏日期：2021年6月9日，保藏地址为：中国、武汉、武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，该菌株具有较高产酶活力，且产蔗糖磷酸化酶稳定性好，该菌产酶的酶活达195.3U，制备出的α‑熊果苷产量达到58.84g/L，且α‑熊果苷摩尔产率为59.48％。

【技术领域】

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌及其应用。

【背景技术】

α-熊果苷(α-Ar)是一种高价值糖苷，广泛应用于化妆品和制药行业，是一种安全可靠的美白剂。酶法是生产α-熊果苷的主要方法，因其原料较简单、生产周期较短而被广泛使用，但由于缺少高催化效率的酶，目前α-熊果苷的产量受到了很大的限制。

本发明利用自行筛选的蔗糖磷酸化酶酶法催化合成，即蔗糖磷酸化酶酶液催化蔗糖和氢醌(对苯二酚)合成α-熊果苷，此反应具有绿色高效、反应温和的优势。

【发明内容】

有鉴于此，本发明的目的在于提供了一种产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌及其应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：

一株枯草芽孢杆菌斯氏亚种(Bacillus subtilis subsp.Spizizenii)菌株SLLSM1，其保藏编号为CCTCC NO：2021697，保藏日期：2021年6月9日，保藏地址为：中国、武汉、武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。

进一步说明，所述的枯草芽孢杆菌斯氏亚种(Bacillus subtilissubsp.Spizizenii)菌株SLLSM1，所述菌株从广西来宾甘蔗地的土壤中分离而得。

本申请还提供一种包含如上所述的枯草芽孢杆菌斯氏亚种(Bacillus subtilissubsp.Spizizenii)菌株SLLSM1的微生物制剂。

进一步说明，所述的微生物制剂，所述微生物制剂中含有活菌数不低于1.0×10⁸个/mL的枯草芽孢杆菌斯氏亚种SLLSM1细胞。

本申请还提供一种生产蔗糖磷酸化酶的方法，具体的方法为：在无菌操作下，用灭菌接种环接枯草芽孢杆菌斯氏亚种SLLSM1到已高温灭菌的发酵培养基(pH＝4.0)中，在37℃、180r/min摇床恒温发酵培养24h后，取发酵液按照接种量8％接入新的发酵培养基中摇床恒温37℃培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液。

进一步说明，所述发酵培养基的配方为：硝酸钾70g/L、酵母粉70g/L、葡萄糖90g/L、磷酸氢二钾5g/L、H₂O 1000mL。

本申请还提供一种所述的枯草芽孢杆菌斯氏亚种SLLSM1在生产α-熊果苷产品上的应用。

本申请还提供一种制备如上所述α-熊果苷的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)、将保存的枯草芽孢杆菌斯氏亚种SLLSM1接种于斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱培养2天，获得活化菌种，用无菌水洗脱菌种获得枯草芽孢杆菌斯氏亚种SLLSM1菌悬浮液，将菌种悬浮液接入摇瓶发酵培养基，在37℃、180r/min摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；