[发明专利]一种产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一株枯草芽孢杆菌斯氏亚种Bacillus subtilis subsp. Spizizenii菌株SLLSM1，其保藏编号为CCTCC NO：2021697，保藏日期：2021年6月9日，保藏地址为：中国、武汉、武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。

2.包含如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌斯氏亚种Bacillus subtilis subsp. Spizizenii菌株 SLLSM1的微生物制剂。

3.如权利要求2所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂中含有活菌数不低于1.0×10⁸个/mL的枯草芽孢杆菌斯氏亚种 SLLSM1细胞。

4.一种生产蔗糖磷酸化酶的方法，其特征在于，在无菌操作下，用灭菌接种环接枯草芽孢杆菌斯氏亚种 SLLSM1到已高温灭菌的发酵培养基中，发酵培养基的pH=4.0，在37℃、180r/min摇床恒温发酵培养24h后，取发酵液按照接种量8%接入新的发酵培养基中摇床恒温37℃培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；所述枯草芽孢杆菌斯氏亚种SLLSM1，其保藏编号为CCTCC NO：2021697。

5.如权利要求4所述一种生产蔗糖磷酸化酶的方法，其特征在于，所述发酵培养基的配方为：硝酸钾70 g/L、酵母粉70 g/L、葡萄糖90 g/L、磷酸氢二钾5 g/L、H₂O 1000 mL。

6.一种利用权利要求1所述的枯草芽孢杆菌斯氏亚种Bacillus subtilis subsp. Spizizenii菌株 SLLSM1制备α熊果苷的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）、将保存的枯草芽孢杆菌斯氏亚种 SLLSM1接种于斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱培养2天，获得活化菌种，用无菌水洗脱菌种获得枯草芽孢杆菌斯氏亚种 SLLSM1菌悬浮液，将菌种悬浮液接入摇瓶发酵培养基，在37℃、180r/min摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；

所述斜面培养基为PS培养基；所述PS培养基配方为：0.5 g蔗糖、0.02 g KH₂PO₄、0.61 gNa₂HPO₄、0.1 g NH₄Cl、0.01 g酵母膏、0.05 g MgSO₄・7H₂O、0.5 mg CaCl₂、琼脂粉 1g，100mL蒸馏水，自然pH，121℃湿热灭菌；

所述摇瓶发酵培养基配方为：硝酸钾70 g/L、酵母粉70 g/L、葡萄糖90 g/L、磷酸氢二钾5 g/L、H₂O 1000 mL；

（2）、在温度为50℃，加入30mmol/L、pH为6.0磷酸盐缓冲液10mL，蔗糖5g，氢醌50g/L，再加入3mL粗酶液，180r/min摇床避光反应5 h，即可得到α熊果苷。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌斯氏亚种 SLLSM1菌悬浮液浓度为1.0×10⁸个/mL。

8.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌斯氏亚种Bacillus subtilis subsp. Spizizenii菌株SLLSM1在制备化妆品或制备药物领域中的应用。