[发明专利]一种HSV减毒株及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种HSV减毒株及其制备方法与应用，属于生物技术领域，本发明针对HSV1和HSV2两种病毒中均具有的、能特异性抑制天然免疫反应/获得性免疫反应/细胞应激保护性反应的不同产物，以及能够进入机体神经系统导致潜伏性感染的能力，设计了一种能够基于缺失修饰病毒不同基因而改变病毒在长期进化过程中形成的、特异性针对宿主细胞应激反应和天然免疫反应的不同信号传导途径和不同效应靶点的作用特性的技术策略，从而得到了一个特定的HSV1基因缺陷减毒毒株；本发明所得HSVI基因缺陷减毒毒株作为治疗及预防疱疹病毒HSV1的疫苗使用，能有效治疗或预防疱疹病毒HSV1的感染所引起的疾病。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体的说，涉及一种HSV减毒株及其制备方法与应用。

背景技术

人类单纯疱疹病毒包括两个型别，HSV1和HSV2(Herpes simplex virus 1,2)。二者均 属于人类疱疹病毒家族α亚组成员。两种病毒均可引起人类各个年龄段的疱疹性疾病，包括 口腔疱疹、生殖器疱疹、疱疹性脑炎及其它疱疹性神经系统的感染。其中，HSV1多见于口腔 疱疹，而HSV2多见于生殖器疱疹。但二者的感染模式均有相互转化的趋势。HSV1和HSV2两 种病毒均在全球有很高的感染率和发病率。不同的统计表明，HSV1在感染人群中的感染率约 在25-47％，而HSV2在15-49岁人群中的感染率约在11-15％。其中，二者因生殖器感染而导 致的新生婴幼儿疱疹性脑炎感染率约为0.1％，其可导致较高的死亡率。至今为止，尚无针对 这两种病毒的有效治疗性药物和疫苗的问世。因此，针对该病毒的疫苗相关的基础及技术研 究具有重要的意义。

发明内容

为了克服背景技术中存在的问题，本发明提供了一种HSV减毒株及其制备方法与应用， 利用基因编辑技术对HSV1的修饰重编，使之成为一种具备免疫有效性和安全性前景的疫苗候 选株。为此，本发明的目的之一在于提供一种HSV减毒株；本发明的目的之二在于提供一种 HSV减毒株的制备方法；本发明的目的之三在于提供一种含有HSV减毒株的疫苗，本发明 的目的之四在于提供HSV减毒株在作为疫苗的应用。

本发明的第一目的是通过以下技术方案实现的：

所述HSV减毒株，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，生物体分类 命名为：人单纯疱疹病毒1形(Herpse simplex virus 1)，保藏编号为CGMCCNo.21598，保 藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西 路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2021年07月13日。

本发明的第二目的是通过如下技术方案实现的：

所述的HSV减毒株的制备方法，通过对HSV1的修饰重编实现，具体包括：剪切HSV病毒的Us5基因第185到329位核苷酸的片段；剪切UL41基因从249到435位编码区的基 因；剪切Us11基因编码区从91到289位的核苷酸基因片段；剪切RL1基因序列中编码从207 到453位氨基酸序列的基因片段。

进一步的，包括如下步骤：

(1)设计引物A，在Cas9酶存在下，剪切HSV病毒的Us5基因第185到329位核苷酸 的基因片段，并经过克隆纯化筛选，得到Us5基因部分剪切病毒株，命名为WR-1；

(2)在WR-1的基础上，设计引物B，在Cas9酶存在下，剪切UL41基因从249到435 位编码区的基因片段，并经过克隆纯化筛选，得到UL41基因部分删除的毒株，命名为WR-2；

(3)在WR-2的基础上，设计引物C，在Cas9酶存在下，剪切Us11基因编码区从91 到289位的核苷酸基因片段，并经过克隆纯化筛选，产生WR-3毒株；

(4)在WR-3的基础上，设计引物D，在Cas9酶存在下，去除RL1基因编码区从207 到453位核苷酸基因片段，并经过克隆纯化筛选，获得HSV1减毒株。