[发明专利]一种用于鉴定布鲁氏菌的引物对、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于鉴定布鲁氏菌的引物对及其应用。本发明提供一种用于鉴定布鲁氏菌的引物组合，其中包括的引物对分别可鉴定牛种、羊种、猪种、犬种、牛种A19疫苗株、牛种S19疫苗株布鲁氏菌。本发明提供的引物对和试剂可以鉴别牛种、羊种、猪种、犬种布鲁氏菌以及S19和S19疫苗株，解决免疫畜群中疫苗与自然强毒株难以区分和畜群净化的难题。不仅可带来社会经济效益，还可为净化畜群中的布鲁氏菌病做出贡献。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于鉴定布鲁氏菌的引物对、试剂盒及其应用。

背景技术

布鲁氏菌病(brucellosis)是由布鲁氏杆菌(brucella spp.)引起的世界范围内广泛流行的人兽共患病，OIE归为乙类传染病。布鲁氏菌分六个经典种，牛种(B.abortus)、羊种(B.melitensis)、猪种(B.suis)、犬种(B.cains)、绵羊种(B.ovis)和森林鼠种布鲁氏菌(B.neotomae)，近年来又陆续发现了鲸种布鲁氏菌(B.ceti)和鳍种布鲁氏菌(B.pinnipedialis)，在人和啮齿类、蝙蝠等动物体内也发现了布鲁氏菌。其中，羊种、牛种、猪种为家畜和人主要流行病原种类。布鲁氏菌病传染方式为接触患病动物、未消毒的肉制品、乳制品，也可经呼吸道、消化道及皮肤黏膜等组织器官侵入体内引起感染。

布鲁氏菌一旦进入宿主体内，细菌侵入血液和淋巴，繁殖并被巨噬细胞吞噬。家畜感染布鲁氏菌病常见的症状有母畜流产和公畜睾丸肿大等，严重者肝脏和脾脏等内脏肿大。家畜感染布鲁氏菌多以淘汰为主，为此，严重影响了畜牧业的健康发展，而且威胁到了人类的健康。

目前，布鲁氏菌的检测以血清学方法为主，但没有统一标准，血清学方法检测只能达到布鲁氏菌属的水平，不能区别是哪种布鲁氏菌种型引起的布鲁氏菌病，存在交叉反应，这就给布鲁氏菌病的防治带来了很多的阻碍，严重影响了布鲁氏菌病的诊断、流行病学调查和疫病预防。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种用于鉴定布鲁氏菌的引物对、试剂盒及其应用。

第一方面，本发明提供一种引物组合，包括：

引物对一：

上游：CGCGGATCCATGACCGTTTCCGTGCTC，

下游：CCCTCGAGTACCATGTGCCGCTCCGG；

引物对二：

上游：GAGAATTCATTGCCGAATGCATGAAGCT，

下游：GCCTCGAGCTATATCTTCAAGTCCTTAG；

引物对三：

上游：GGGCGTGACCTTGCAGGAAT，

下游：TGCCGACCCTCACCAGAT

本发明针对牛种布鲁氏菌特异缺失基因NC_017250、布鲁氏菌A19和S19疫苗株WP_002965788.1基因的缺失片段以及布鲁氏菌S19疫苗株eryC基因的缺失片段开发出三对引物；其中，针对牛种的缺失基因NC_017250的引物对在检测时，除了牛种没有显示条带，其它种均有条带；WP_002965788.1基因是S19和A19都缺失的，再配合只有S19缺失，而A19有的eryC基因，就能区分S19疫苗和A19疫苗。该引物组合可以用于辅助鉴定不同种型的布鲁氏菌。

进一步地，还包括：

引物对四：

上游：GCCGGGAATTCTTGTACGGTTTACTGAACAC，

下游：TGTCTCGAGTCAAGGCTGTTGGATTCGCA；

引物对五: