[发明专利]一种用于鉴定布鲁氏菌的引物对、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种引物组合，其特征在于，包括：

引物对一：

上游：CGCGGATCCATGACCGTTTCCGTGCTC，

下游：CCCTCGAGTACCATGTGCCGCTCCGG；和

引物对二：

上游：GAGAATTCATTGCCGAATGCATGAAGCT，

下游：GCCTCGAGCTATATCTTCAAGTCCTTAG；和

引物对三：

上游：GGGCGTGACCTTGCAGGAAT，

下游：TGCCGACCCTCACCAGAT。

2.根据权利要求1所述的引物组合，其特征在于，还包括：

引物对四：

上游：GCCGGGAATTCTTGTACGGTTTACTGAACAC，

下游：TGTCTCGAGTCAAGGCTGTTGGATTCGCA；和

引物对五:

上游：TCTATTATTACGGACGGCTGGCTGAG，

下游：GTGGTGGCCCATGTGGCGCTT；和

引物对六:

上游：GCCCTACCCGAAAGAAA，

下游：ATCCGCTAGACCGCATCCC。

3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括：

PCR反应液、DNA聚合酶、阳性质控标准品和阴性质控标准品；

所述的阳性质控标准品为布鲁氏菌s2疫苗株，所述阴性质控标准品为无菌双蒸水。

5.权利要求1或2所述引物组合，或权利要求3或4所述试剂盒在鉴别布鲁氏菌种型中的应用；所述应用用于非疾病诊断。

6.一种非疾病诊断的鉴定布鲁氏菌种型的方法，其特征在于，包括：

提取待测样本的DNA；

采用权利要求1或2所述引物组合中任意一对或多对引物，或权利要求3或4所述试剂盒对所述待测样本的DNA进行PCR检测；

通过检测结果判断待测样本所含有的布鲁氏菌种型；

所述PCR检测的反应条件为：

95℃5min，94℃1min、59℃50sec、72℃50sec，30个循环，72℃10min。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述通过检测结果判断待测样本所含有的布鲁氏菌种型为：

取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过观察在272bp，420bp，660bp，879bp，1200bp，1400bp处是否显现条带判断所含有的布鲁氏菌种型。