[发明专利]一种IGF-1的低成本制备方法及其应用有效
| 申请号： | 202110854619.9 | 申请日： | 2021-07-28 |
| 公开（公告）号： | CN113292647B | 公开（公告）日： | 2021-10-29 |
| 发明（设计）人： | 黄凯宗;汪舒姝 | 申请（专利权）人： | 南京谷浦生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/65 | 分类号： | C07K14/65;C12N15/70;C12N15/16;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市江北新区新锦*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 igf 低成本 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种IGF-1的低成本制备方法，其特征在于：按照先后顺序包括以下步骤：
S1：ELP-IGF-1质粒的构建：构建ELP-IGF-1质粒，其中ELP-IGF-1基因序列如SEQ IDNO：1所示；
S2：工程菌的构建：将上述ELP-IGF-1质粒转入BL21大肠杆菌中，得到工程菌；
S3：将上述工程菌培养于TB培养基，当OD值达到0.5值，温度调为23℃过夜诱导，收集菌体，超声破碎，离心取上清；
S4：将上述步骤得到的上清30℃下水浴加热，30℃离心，取沉淀部分；
S5：将沉淀部分用预冷的Tris-HCl缓冲液溶解，4℃离心取上清；
S6：上清加入带His-Tag的TEV酶，4℃过夜酶切；
S7：酶切完成后，蛋白质溶液置于30℃下水浴加热，30℃离心后取上清，上清部分用带镍的磁珠结合游离的TEV酶，离心回收磁珠，上清经冷冻干燥后即为IGF-1。
2.根据权利要求1所述的一种IGF-1的低成本制备方法，其特征在于：在步骤S1中，所述ELP-IGF-1质粒构建步骤如下：
（1）：合成ELP基因，将ELP克隆至pET-23a的NdeI与HindIII酶切位点；
（2）：合成带TEV蛋白酶切位点Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly的IGF基因序列，使用无缝连接酶将TEV酶切位点的IGF基因序列连接至pET-23a-ELP的HindIII酶切位点，得到ELP-IGF-1质粒。
3.根据权利要求1所述的一种IGF-1的低成本制备方法，其特征在于：在步骤S3中，所述TB培养基包括蛋白胨12g/L、酵母提取物24g/L、甘油4ml/L，17mM的KH2PO4与72 mM的K2HPO4。
4.根据权利要求1所述的一种IGF-1的低成本制备方法，其特征在于：在步骤S3中，所述离心温度为4℃。
5.根据权利要求1所述的一种IGF-1的低成本制备方法，其特征在于：所述Tris-HCl缓冲液pH值为9.0。
6.根据权利要求1所述的一种IGF-1的低成本制备方法，其特征在于：在步骤S6中，所述TEV酶的添加量为1mg蛋白加入25U TEV酶。
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